折磨操作者和小鼠的尾静脉注射，有什么快速入门技巧？
过五关、斩六将，历经九九八十一难后，在一个阴雨连绵的下午，终于整理完一个课题的所有数据，仔细的检测一遍后感到非常满意，内心暗想：「嗯，我觉得有望可以投一下 CNS」。
随后怀着忐忑的心情将其发送给导师。
10 min 后「叮」的一声收到了邮件回复的消息「来我办公室一下」。
「嗯，导师不愧是导师，效率真高」，我怀着对我导的仰慕之情，向其办公室走去。
「嘿嘿，也不知道迎接我的是鲜花还是掌声」，傻笑的我丝毫没有注意到路上师弟师妹们投来异样的眼光。
「咚咚咚」三声敲门后，我导，「进来」
我，「嗯，嗯？没有鲜花，也没有掌声，导师也没对我笑，也不说不让我坐下，什么情况？怎么办，我该说什么？」
沉寂如同一个世纪似的十秒之后，传来我导天籁般的声音「为什么你的研究没有做动物实验，没有做动物的文章能发几分（IF）的期刊？」
「好的，老师，我马上去补」，霜打茄子似的我转身走向实验室开始新一轮的征程。
众所周知，由于人体疾病的复杂性以及临床实验的昂贵性，临床前的动物实验对于新药研发是必不可少的一个研究环节。日常科研中，最常用的实验动物有小鼠、大鼠、猫、鸽、狗、猴等，其中小鼠和大鼠是比较方便的实验动物，狗和猴（或猩猩）是相对昂贵的非啮齿类动物。
在这之中，小鼠又因为高繁殖、易饲养、表达明显、价格便宜等特点成为复制人类疾病动物模型和研究基因功能的首选模式动物。
百度百科中关于小鼠有这么一段介绍「老鼠的智力超乎我们的想象，智力成熟度似乎能与我们匹敌」。实验用小鼠的智力究竟有多高无从考证，但不可否认的是它们具有自己的思维，具有自己的情绪。
关于情绪对人类健康的影响，目前临床上已有很多的研究报道，不论机制如何，确定的是：乐观的情绪或者积极的心态有助于身体健康和疾病的恢复。那么在动物实验中，如果因为我们人为的操作而使小鼠产生恐惧、害怕等心理，这种情绪是否会对实验结果造成一定的影响？
接下来我将以我的亲身经历，选取尾静脉注射给药和小鼠肿瘤模型来揭示：因尾静脉技术差，导致小鼠差情绪的产生，对肿瘤生长可能带来的影响。
尾静脉注射的几种常见方法
相比于灌胃、皮下，腹腔等给药方法，尾静脉注射可能是相对有难度的一种给药方式。除了多加练习找到属于自己的感觉外，我个人也总结了一些小经验来最大限度的克服「针头刺进去之后不能准确找到血管的位置」这一最大难点，仅供大家参考。
我们首先需要明确的一点是，并不是所有老鼠的血管位置都是固定的，其深浅是受多种因素影响的，如体重等。这要求我们在对不同的老鼠给药时都需要调整进针的力度。那么首先我们的大脑中应该对血管的位置有一个初步的了解，即表皮层、真皮层（血管），以及皮下组织。有了这个大体的概念后，以下几种方法可以更快的帮助我们掌握这门技术。从易到难依次为：
1、试针法。进针后尝试推动液体，如果发现进针较易，但皮肤迅速鼓起，那么针头应该在表皮层；如果进针较易，且抽针后有血液回流，那么针头准确的进入了血管中；如果进针较难，且尾巴进针处泛白，那么针头应该在皮下组织。在二次进针时，根据第一针的现象来调整进针的力度。
2、放血法。通常在小鼠第一次给药时，常常会因为血管的不清晰而难以定位，但几次给药之后，发现血管定位会越来越容易。所以在具有一定的经验后，第一针给药时，可以尝试给一针较重的力度使血管破裂，目的在于放血使血管充盈清晰，有助于二次进针时给药。
3、肉眼捕捉法。多次试药或不成功的给药会导致小鼠尾巴的溃烂。所以在 2 的基础上，进阶版为如果在进针的那一刹那，可以看到血液短暂的停顿，那代表针头成功的进入到了血管中，不需要进行试药。
4、九九归一法。在大量的成功进针建立起无敌的信心后，终极版进针的状态就是「人针合一」，进针的那一刹那，就知道此针必进。
5、其它。也有水浴加热或者红外灯照射法，都是辅助识别血管的方法。这些方法在给药时花费的时间较长，但对于初学者练习时，可以尝试使用。
此外，我们实验室所用的尾静脉注射装置也推荐给大家，不论初学者还是九九归一者都适合使用。如图 1 所示：
①为一个 50 mL 的离心管，前后通孔，用于老鼠呼吸与尾巴露出；
②为一个升降器，用于离心管的固定及进针位置高低的调整；
③为离心管固定好之后的样式；
④为调整好进针位置后，操作人员准备进针。
这套装置的优势在于有效的固定老鼠，进针高度的调节，以及价格的低廉。
图 1. 小鼠尾静脉注射装置示意图
在尾静脉给药时，对于九九归一法的大神，可能一次给药只需要一个呼吸的时间，翻译过来即为吸气，进针，呼气，拔针。整个过程行云流水，不超过 10 秒钟，对于操作者和老鼠本身来讲都不会感到什么痛苦。
不熟练的尾静脉注射操作，对实验结果影响有多大？
然而，对于初学者以及被给药的老鼠，尾静脉注射可能就是一个比较痛苦的过程，经常会看到师弟师妹们从尾巴的末端已经试针到顶端，而给药还没有成功，这中间的时间消耗可能高达 30 min。
这不仅对于操作者的心里是个挑战（如所给药物的经济价值比较高，容不得浪费），对于被给药的老鼠更是一种煎熬。对于一种生物，被长时间的固定在一个容器中，难以移动，还要持续性忍受尾巴传来的痛感，可想而知小鼠会多么的焦躁以及害怕，具体的状态反映为，在进针时老鼠会剧烈的抽动尾巴，同时传出吱吱的叫声，伴随尿液以及大便的流出。
那么在做疾病模型时，这种不健康的心理状态是否会加重疾病的恶化呢？
在很久很久以前我还是一个初学者时，属于我的第一次动物实验是为了研究一味药的抗肿瘤效果。如同上述情况一样，尾静脉注射给药不成功，我很痛苦，老鼠也很痛苦。
看着瘤体积一天天的长大，没办法我只能将这批老鼠当作练习尾静脉给药的老鼠，同时为了防止来自我导的批评，我美名其曰设计了一个名为「心情对小鼠肿瘤生长的影响」。
结果如图 2 所示，saline+untreated 代表荷瘤小鼠不做任何处理，saline+human 代表由我对它进行尾静脉注射，14 d 后我惊奇的发现，saline+human 组老鼠的瘤体积显著性高于 saline+untreated 组。
图 2. 不成熟的尾静脉注射对老鼠肿瘤体积的影响
尾记
希望每一位初学者在进行涉及到尾静脉注射的正式实验前，都要多加练习，掌握一定的熟练度后再进行正式的实验，进而取得人和鼠共同的快乐。最后预祝大家的动物实验每次能圆满成功。
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