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葡萄糖耐量检测实验(GTT)

相关实验:葡萄糖负荷试验

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原理

通过过量摄入葡萄糖,在不同的时间节点通过血糖仪对机体的葡萄糖含量进行检测,以评估机体对葡萄糖的吸收代谢能力。

用途

反映机体对血糖浓度的调节能力。

材料与仪器

葡萄糖粉末(国药)、生理盐水、血糖仪

血糖试纸和 1 mL 注射器、手术剪

步骤

1、实验前准备:

小鼠准备:每组实验小鼠数量根据实验设置,一般大于等于 6 只,选取身体状况良好的雄性鼠作为实验对象(若是肥胖鼠作为实验对象,则需要在高脂饮食诱导达到肥胖标准之后进行检测)。于实验前一天下午 5 点将小鼠换入干净的笼子中禁食,禁食 16 h,至次日上午 9 点。禁食期间,小鼠保持正常的饮水。

2、称取每只小鼠的体重,并用记号笔在小鼠尾巴根部标记序号,以便在实验中能够快速辨别所测小鼠(或者在实验前几周用剪脚趾的方法给每只小鼠编号)。

3、次日上午 9 点,开始葡萄糖耐受实验。空腹基础血糖测定:将小鼠从笼子中取出,轻放于铁网格之上,用剪刀剪去小鼠尾巴末端约 1~2 mm,轻轻顺着尾静脉挤压小鼠尾巴,让血液富集成一滴,滴最开始一滴血液弃去不用,用第二滴的血液。用血糖仪和血糖试纸测定空腹血糖,测定值默认为 0 min 的血糖值。

4、让小鼠稳定片刻后,开始准备腹腔注射葡萄糖(IPGTT)或灌胃葡萄糖(OGTT)(可预先按照小鼠体重吸取相应体积的葡萄糖溶液,在相应的注射器上编上小鼠编号)。一般葡萄糖耐受实验的葡萄糖浓度为 2 g/kg 体重,用生理盐水配制 200 mg/ml 的葡萄糖溶液。

IP GTT:将小鼠轻轻抓起,按照标准的腹腔注射操作用 1 mL 注射器给小鼠注射葡萄糖溶液。注射的体积根据小鼠的体重决定,每 g 体重注射 0.01 mL。从注射完毕开始计时。

OGTT:将小鼠轻轻抓起,按照标准的灌胃操作用 1 mL 注射器连接灌胃针给予小鼠葡萄糖溶液。灌胃的体积根据小鼠的体重决定,每 g 体重灌胃 0.01 mL。从灌胃完毕开始计时;一般情况下,每只小鼠的操作间隔在 1 min,这样可以准确的按照所规定时间完成对每只小鼠的血糖测定。

5、在 15 min,30 min,60 min,90 min,120 min 按照步骤 3 的操作测定每只小鼠各个时间点的血糖值。

6、实验完毕后,将每笼小鼠补充上饲料,分析数据。

注意事项

1、保证在规定的时间内能检测完所有的实验对象,确保每只小鼠检测的时间点。

2、操作过程中尽量轻柔,使小鼠不至于过度惊吓,造成小鼠血糖过高。

3、血糖仪注意电池电量充足,避免使用过程中没有电。

4、血糖试纸注意保存,不能受潮,污染,以免数据错误。

常见问题

1、血糖仪测不出值?

答:可能有两种情况。第一种就是血糖含量太低,这种在 GTT 实验中基本不会出现。

但是不排除小鼠很弱小会造成。第二种就是血糖含量太高了,一般血糖仪上会出现 H 来表示。

这个时候一般是由于老鼠具有糖尿病的症状导致血糖水平过高检测不出。遇到此种情况,可把血液用生理盐水或 PBS 稀释后再用血糖仪检测。

来源:丁香实验

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