🔥 对硝基酚磷酸钠法

酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）广泛存在于各种细胞中，在部分癌细胞中酸性磷酸酶往往会异常表达。以对硝基酚磷酸钠作为酸性磷酸酶反应底物，在碱性条件下能够水解生成黄色的对硝基酚，通过比色测定即可对 ACP 进行定量分析。

用以测定组织或细胞中 ACP 的水平。

组织或细胞，RIPA（中弱）裂解液，对硝基酚磷酸钠溶液，缓冲液

分光光度计，恒温水浴锅，剪刀，研钵，试管等

1. 取细胞沉淀或组织，加入 RIPA 裂解液，使用剪刀或研钵对细胞或组织进行充分裂解（置于冰上），将裂解液收集至离心管中，4 °C 下 15000 rpm 离心 15 min，收集上清液，此时上清液中包含酸性磷酸酶。

2. 加入缓冲液和对硝基酚磷酸钠溶液。取少量上清液，加 ddH₂O 进行稀释（稀释约 5~10 倍），向阴性对照组（无酸性磷酸酶组）与测定酶活组加入的缓冲液与对硝基酚磷酸钠溶液等量。混匀后，在 37 °C 恒温水浴锅中保温反应 10~15 min，每5min摇动一次，反应结束后，加入 0.5 M NaOH 溶液终止反应。此时 pH = 14，取 1 mL 液体在分光光度计 400 nm 下测试吸光度。

3. 酶活性 （V：酶的体积，V1：每次用酶的体积）

1. 反应要在冰上进行，全程保持低温操作。

2. 提取得到的酶应该立刻进行反应，保存于 -20 °C 也要尽快进行试验。

3. 加入 NaOH 后，对硝基酚呈现黄色。