盲肠结扎穿孔实验（CLP）

在盲肠结扎穿孔术的模型中，败血症起源于腹腔内的多菌感染灶，随后细菌入血，引发全身炎症反应。该模型是构建脓毒血症的经典模型。

在研究脓毒血症，脓毒症相关性脑病时可以通过盲肠结扎穿孔术来构建该疾病动物模型。

在构建脓毒血症模型时，有些人会选择腹腔注射 LPS 来构建此模型，相比于盲肠结扎穿孔术此方法会更加方便快捷，但 LPS 毕竟是药物，注射进动物体内会被代谢，可能会造成模型不稳定的情况出现，而盲肠结扎穿孔术通过手术的形式所构建的脓毒血症模型会更加的稳定。

剃毛器，75% 酒精，碘伏，眼科剪，缝合线与针，直镊，弯镊，戊巴比妥钠，加热器，1ml 注射器，生理盐水，纱布。

1.选择所需动物禁食 12 小时，称重，根据不同动物体重注射适量的戊巴比妥钠麻醉动物。

2.将动物腹部朝上，固定四肢，用推毛器推去动物腹部毛发，75% 酒精棉球消毒一遍，碘伏消毒一遍，手术器械提前浸泡酒精或高压消毒。

3.将动物下腹正中打开 1cm 左右切口，找出盲肠，在盲肠远端与盲肠底部中间选择合适位置（结扎位置越靠近盲肠底部脓毒症的严重程度越高）结扎。

4.结扎后将针头从肠系膜向反肠系膜的方向进行盲肠穿刺（“贯穿式”）。

5.从穿刺的孔中挤出一滴粪便。

6.将盲肠放回腹腔内，缝合腹膜与皮肤。

7.根据动物体重给予适量的生理盐水。

8.将动物放在恒温加热器上保持体温，防止动物发生低体温休克导致死亡。

图片引自：Rittirsch D, Huber-Lang MS, Flierl MA, Ward PA. Immunodesign of experimental sepsis by cecal ligation and puncture. Nat Protoc. 2009;4(1):31-6. doi: 10.1038/nprot.2008.214. PMID: 19131954; PMCID: PMC2754226.

1.备皮要仔细，防止毛发进入腹腔造成人为不可控的感染影响实验结果。

2.麻药不可使用水合氯醛，水合氯醛会增加动物死亡率。

3.每只动物造模时结扎的高度要一致，才可保证实验结果的可重复性。

4.粪便挤出后，将盲肠放回腹腔时注意不要将粪便蹭在外表皮肤上，若粪便没有进入腹腔可能会导致造模失败。

1.为什么造模后动物死亡率过高？

答：首先在结扎盲肠的高度上要注意，若靠近盲肠底部即结扎75%盲肠，则为重度脓毒血症模型其致死率为 100%；其次在麻药的选择上尽量使用戊巴比妥钠，水合氯醛有较高致死率；动物造模之后要及时补液，后每隔 3 小时补一次液，一共补液两次即可；

造模后要保证动物体温，防止动物低体温休克造成的死亡；造模后动物的饲养环境应保持干净，尽量无菌，防止造成二次感染。

2.为什么死亡率过低，甚至动物没有死亡？

答：此情况应考虑是否造模成功，粪便在造模过程中是否进入腹腔中。