合作专家 | 黄玥琳博士
生理学 大连医科大学
原理
“八臂迷宫”顾名思义有八个由中心向外发散的八个臂组成,且每个臂的尽头都有食物提供装置,将动物放在迷宫中央后根据分析动物摄食的路径即进入每臂的次数,时间,正确次数,错误次数,路线等参数可以反映出实验动物的空间记忆能力。
用途
八臂迷宫(8-Arm Maze)用来检测动物在不同条件下学习记忆方面的能力,经过一定时间的训练后,动物可以记住食物在迷宫中的空间位置。该方法可以同时测定动物的工作记忆(working memory)和参考记忆(reference memory )。
材料与仪器
酒精喷壶,厨房用纸,八臂迷宫,摄像跟踪系统。
步骤
1.将动物提前放置实验房间适应一周,称重,禁食 24 小时。此后每天训练结束后限制性的给予正常粮食(根据体重不同,大鼠 16-20g 左右粮食,小鼠 2-3g),使得鼠的体重保持在正常鼠体重的 80%-85%。
2.第二天,将 8 臂与中央区均撒食物颗粒(4-5 粒,直径约 3-4mm)。然后同时将 4 只鼠一起放在中央区,将各个臂开放,让其自由进食,探索 10min。
3.第三天,重复第二天的实验。注意这一过程不要让动物应激,保持环境舒适,让动物适应迷宫环境。
4.第四天,不再 4 只鼠一起放,单只动物训练;每个臂的外端食盒处放一颗粮食,让动物自由摄食。粮食吃完或者 10min 以后停止实验,将动物取出。
5.第五天,将食物放在食盒内,重复第四天的训练,一天 2 次(间隔 1 小时以上)。
6.第六天以后,随机选择 4 个臂,每个臂放一颗粮食,关闭各个臂的门,将动物放在迷宫中央,30s 以后,臂门打开,让动物在迷宫中自由摄食,直到动物将 4 个臂的食物全部吃完。如果 10min 食物仍没吃完,终止实验。
记录指标:
①工作记忆错误(working memory errors),在检测过程中,动物再次进入已经吃过粮食的臂中的次数;
②参考记忆错误(reference memory errors),即动物进入不曾放过食物的臂中;
③进入各个臂的总次数
④测试时间,即动物吃完所有粮食所花的时间。
此外,计算机还可记录动物在放射臂内及中央区的活动情况,包括运动距离和运动时间等。连续 5 次训练的工作记忆错误为零、参考记忆错误不超过 1 次时,可以开始药物测试或脑内核团结构毁损实验。一般先给溶剂(如生理盐水),再给削弱记忆的药物,然后加用增强记忆的药物,剂量由低到高。
注意事项
1.每次训练结束后,应用 75% 酒精擦拭迷宫内部,放置上一批动物的气味影响后续动物行为。
2.保持训练屋内安静,干净整洁,否则将会影响实验数据。
3.放置动物时要轻柔尽量避免造成动物应激行为。
常见问题
1.为什么动物对食物不感兴趣,或吃食物的时间过长?
答:没有提前禁食 24 小时,食物颗粒太大,影响实验结果。将动物禁食 24 小时,控制食物颗粒大小在直径 4-5mm 左右,方便动物禁食且不浪费过多时间影响实验结果。
2.为什么动物在迷宫中不动,不探索?
答:可能在放置动物时不够轻柔或者环境中有噪音等影响因素,上一批动物气味未擦除使得动物发生应激行为。
来源:丁香实验