慢性温和不可预测性应激模型实验（CUMS）

慢性不可预知温和应激 (CUMS) 模型实验:体外给予如禁水、禁食、夹尾 冰水游泳、感觉剥夺等刺激，经过 4 周的应激刺激导致受试机体的功能障碍，导致精神性疾病抑郁症的发生。

用于抑郁症动物模型的构建。

1. 材料：
1）鼠笼；2）垫料：3）水瓶：4）冰块；5）照明灯；6）蔗糖；6) C57BL / 6J 小鼠;

2. 仪器：
1）制冰机；2）噪音仪器；3）电击箱；4)强迫游泳桶；5）纯水超纯水机一体系统；6）体重秤；

一、步骤：

1. 受试动物分笼喂养于室温 25 士 2℃ 的室内，12 小时昼夜节律自由进食进水，给与无菌的饲料和干净情洁的饮用水，适应 1-2w 天后， 随机分组，测试并记录受试动物的体重糖水偏爱百分比等基线数据，剔除基线数据显著差异的受试动物；

2. 依据分组，模型组每天随机给予 1-2 个刺激条件，连续进行四周，刺激无规律；

3. 刺激因子包括：45 度倾斜鼠笼7h、禁水 24 h，禁食 24 h，噪声（>80dB）3 h，潮湿垫料 24 h，冰水游泳 5 min，灯光昼夜颠倒 12h，合笼饲养 24h（6只一笼），足底电击 1min；

4. 造模结束进行行为学测量(糖水实验、旷场实验、悬尾实验等)，验证模型。

二、应用刺激说明：

1）45 度倾斜鼠笼：7 h， 将鼠笼与水平面倾斜45度角放置；

2）禁水：24 h，剥夺饮水；

3） 禁食：24h，剥夺饮食；

4）噪声：3 h，高中音量，类似蛇音（>80 dB）；

5）潮湿垫料：24 h，向鼠笼中倒入清水,使垫料湿润,以水位漫过垫料表面为度,维持浸湿状态 24h,24h 后更换清洁垫料；

6）冰水游泳：5 min，将受试动物放入温度调至 4℃ 的水中， 受试动物的脚尖刚好能触及到桶底， 5min 后将动物取出。

7）灯光昼夜颠倒：12h，天黑开灯照明；

8）合笼饲养：24h，6 只一笼，正常单独但笼饲养；

9）足底电击： 1min，受试动物置于电击箱，持续 1min。

三、糖水偏好实验（Sucrose preference test）

测量剥夺饮水后受试动物1h内的糖水和自来水消耗量(糖水和自来水双瓶供饮)，计算获得相对糖水消耗量(糖水消耗/体重× 100g )以及糖水偏好百分比(糖水消耗量/总液体消耗× 100% ),取三次测试平均值作为糖水测试基础值。

具体步骤：

1）所有动物受训饮用 1% 的蔗糖水,开始 48ｈ内，将训练受试动物适应含糖饮水，将受试动物暴露于 1 瓶为１％ 的蔗糖溶液， 另一瓶为清水；

2）禁水禁食 20ｈ 后。 给与每只受试动物定量好的两瓶水：1 瓶１％蔗糖水、1 瓶清水， 饮水 1 h。 然后通过称取饮水瓶的重量。计算获得相对糖水消耗量(糖水消耗/体重× 100%)以及糖水偏好百分比(糖水消耗量/总液体消耗× 100%),取三次测试平均值作为糖水测试基础值。

1. 随机给予刺激，连续两次刺激不能相同，使受试动物不能预料刺激的发生；

2. 受试动物饲养空间隔音且足够大；

3. 给予冰水游泳刺激时注意防止受试动物淹溺；

4. 固定实验人员进行实验操作。

模型组和对照组无差异：

1）刺激时间造模不够，适当延长造模时间；

2）进行造模实验时，为了避免相互影响，应该尽量单笼饲养；

3）随机时间随机给予刺激因子，避免动物产生适应性。