家兔急性肾功能衰竭法

急性肾功能衰竭是由急性肾缺血、肾中毒等引起的在短时间内肾功能进行性下降的临床综合征。

家兔急性肾功能衰竭法的基本原理是通过使氯化汞（HgCl₂）致使动物肾小管变性坏死，复制急性肾功能不全的动物模型。

家兔急性肾功能衰竭法可用于观察动物血尿素氮、尿液成分的变化，酚红排泄率测定及内生肌酐清除率的变化，加深对急性肾功能衰竭时内环境变化的理解。

器材：婴儿秤，兔固定台，手术器械一套，注射器（1 mL、5 mL），试管，滴管，吸管，试管夹，试管架，酒精灯，动脉夹，膀胱漏斗，离心机，水浴锅，分光光度计，量筒（500 mL）1 个，显微镜。

试剂：

① 1％ HgCl₂；

② 0.9％ Nacl 溶液；

③ 20％ 乌拉坦溶液；

④ 5％ 葡萄糖溶液；

⑤ 20％ 葡萄糖溶液；

⑥ 0.2％ 肝素钠溶液；

⑦ 5％ 醋酸溶液；

⑧ 酸混合液；

⑨ 尿素氮标准液 Ⅱ；

⑩ 二乙酰-肟-氨硫脲（DAM-TSC）液；

⑪ 肌标准应用液；

⑫ 苦味酸；

⑬ 0.6％ 酚红溶液;

⑭ 10％ NaOH 溶液。

家兔急性肾功能衰竭法的基本过程可分为如下几步：

（一）复制模型

取家兔两只，一只为正常对照组，另一只为中毒实验组。于实验前一天称重后，实验组家兔皮下或肌内注射 1％ HgCl₂ 溶液（1.5~1.7 mL/kg，一次注射），造成急性中毒性肾功能衰竭模型，对照组家兔则在相同部位注射等量的生理盐水，作为对照。两只家兔实验前均喂少量蔬菜。

（二）麻醉与固定

家兔称重后，腹腔注射 20％ 乌拉坦（5 mL/kg），将实验兔仰卧位固定于兔手术台上，耳缘静脉注射 5％ 葡萄糖溶液（15 mL/kg，5 min 内注完）以保证有足够的尿量。

（三）腹部手术

下腹部剪毛，在耻骨联合上缘 1.5 cm 处做长约 4 cm 的正中切口，分离皮下组织，沿腹白线切开腹膜，将膀胱翻出腹外，辨认清楚输尿管，并向肾侧仔细分离两侧输尿管 2~3 cm，在其下方穿一条线，将膀胱上翻用线结扎膀胱颈部（即尿道内口）以阻断它同尿道的通路，然后在膀胱顶部选血管较少处，做一环形的荷包缝合，缝合线两端要足够长，暂不结扎；在荷包缝合的中央剪一纵行小切口，插入膀胱插管，然后用荷包缝合线将切口边缘固定于膀胱插管的橡胶上。收集 1 h 尿液备用，并换算成每分钟尿量。

（四）颈部手术

颈部做正中切口（5~7 cm），暴露气管，在甲状软骨下约 1 cm 处做倒「T」形切口，插入气管插管，分离左侧颈总动脉约 2 cm，于分离的颈总动脉远心端和近心端分别穿线备用，用于动脉插管。向动脉插管内注入 0.2％ 肝素钠溶液，结扎左侧颈总动脉远心端，近心端用动脉夹夹闭。在结扎处的近心端一侧用眼科剪剪一斜口（剪口应尽量靠近结扎线，剪刀与颈总动脉纵轴成 30°~45° 角，剪开血管周径的 1/3~1/2），向心脏方向插入已注满 0.2％ 肝素钠溶液的动脉插管，进入约 1 cm，将血管及插管结扎牢固，并在结扎线的上方打结固定，以防滑脱。保持动脉插管与动脉在同一直线上，然后用胶布将动脉插管固定在手术台上。

（1）尿液收集应尽量避免蒸发，以影响数据的准确性。

（2）暴露膀胱的手术操作应轻柔，防止刀片划破膀胱造成尿液外溢。

（3）边采血边摇动，防止凝血。

（4）煮沸及冷却时间应准确，否则颜色反应消退。

（5）实验前应给兔子多喂青菜，或在麻醉后立即给动物进行适量的输液，以增加其基础尿量。

（6）避免损伤动、静脉，严防出血。如发现有出血现象，必须立即止血。

（7）试验中需多次静脉注射。应注意保护兔的耳缘静脉。注射时，先从末梢端开始，逐渐向耳根端移近；或选用小儿头皮针刺入耳缘静脉，用胶布固定。用生理盐水维持使形成一静脉通路以便于多次注射使用。

（8）试管、吸管等器材要求清洁，血清、尿液标本和标准液等试剂量必须准备。所有操作均应按生化要求严格进行。