虫媒病毒的血清学检测

虫媒病毒（ arbovirus）是指一些通过吸血节肢动物叮咬敏感脊椎动物而引起的自然疫源性疾病及人兽共患病的一群病毒，包括不同基因组的许多病毒家族，如黄病毒科（flaviviridae）黄病毒属（Flavivirus）。披膜病毒科（ togaviridae）甲病毒属（Alphavirus）。布尼亚病毒科（bunyaviridae）、呼肠孤病毒科（reoviridae）以及正黏病毒科（orthomyxoviridae）。作为节肢动物传播的病毒，其共同特征是能在节肢动物体内繁殖，经过一定的外潜伏期，通过叮咬吸血又将病毒传给新的宿主。常见的节肢动物媒介有蚊，蝉、白岭，螺、蛀、纳、螨，尤以蚊和最为重要。鸟类、蝙蝠、灵长类和家畜是最重要的脊椎动物宿主。

虫媒病毒血清学抗体检测方法包括免疫层析法、免疫荧光法、酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫杂交法、血凝抑制法（HI）、中和试验等。目前使用较多的是免疫层析法、免疫荧光法和酶联免疫吸附法。值得注意的是，由于黄病毒之间存在抗原性交叉，在进行血清学实验时应设立合适的对照，对实验结果的解释要慎重。

器材：乙脑病毒 IgM 和 IgG 抗体的商品化试剂盒

1. 酶联免疫吸附试验（ELISA）病毒血清学检测方法中最常见的方法为 ELISA 法，已有 ELISA 法检测登革病毒和乙脑病毒 IgM 和 IgG 抗体的商品化试剂盒。应用虫媒病毒单克隆抗体的 IgM 抗体捕捉 ELISA 法（Mac-ELISA）是 WHO 推荐的一种用于检测虫媒病毒的血清学方法，因其操作简便。快速，比其他方法能提供更多信息，因此目前广泛应用于登革热。乙型脑炎﹑黄热病，西尼罗热等虫媒传染病的诊断。

2. 间接免疫荧光试验（IFA）应用鼠单克隆抗体（McAb）进行 IFA 分析是一种有效。快速，经济的黄病毒诊断方法。检测登革病毒 IgG 抗体，一般认为发病一周采血，如抗体效价达 1:80 以上，对诊断为登革病毒感染有参考意义。

3. 胶体金免疫层析快速试验（ICT）胶体金免疫层析试验用于检测登革病毒和基孔肯雅病毒抗体的技术日趋成熟。胶体金免疫层析技术是根据 ELISA 改良的简单。快速的方法。胶体金免疫层析法检测一份标本通常只需 10~15 分钟，操作简便，无需特殊实验设备，特别适合在流行病学调查的现场快速检测，但从检测抗体 IgM 和 IgG 的灵敏度和特异性来看，胶体金免疫层析法与 ELISA 法相比，结果稍差。

4. 微量中和试验利用中和试验可检测急性期和恢复期双份标本抗体效价的变化，以确定虫媒病毒感染的存在。该技术费用昂贵，技术要求高，但该技术在鉴别 2 种抗原性相关病毒的感染中非常有用。西尼罗病毒病与乙型脑炎、圣路易脑炎等有交叉反应，最好采取患者急性期和恢复期双份血清，两份血清同时进行检测，以恢复期血清较急性期 IgG 抗体滴度升高 4 倍以上为阳性。判定结果时要注意和乙脑的交叉，最好同时用西尼罗病毒和乙脑病毒两种抗原进行 ELISA 或空斑减少抑制试验，观察双份血清对哪一种抗原的反应滴度更高。如果双份血清对西尼罗病毒抗原的滴度有 8 倍升高，而对乙脑抗原仅 4 倍升高，则可诊断为西尼罗病毒感染；相反，如果双份血清对西尼罗病毒抗原的滴度为 4 倍升高，而对乙脑抗原为 8 倍升高，则可诊断为乙脑。该方法不仅可作为临床确诊的依据，还可用于流行病学回顾性调查。

5. 血凝抑制试验﹑螂传脑炎血凝素可从病毒感染鼠脑中提取。血凝试验可检测病毒浓度。血凝抑制抗体的消长与中和抗体呈正相关。婢传脑炎病毒对鸽红细胞的凝集效果优于鹅红细胞。血凝抑制试验中，蝉传脑炎病毒与同一复合群的其他病毒均有交叉反应。

6. 补体结合抗体测定﹑感染蝉传脑炎病毒后，补体结合抗体只能维持半年左右。故补体结合抗体的存在说明半年内曾感染该病毒，尽管双份血清效价差 4 倍以上时最有价值，但单份血清阳性时也有诊断意义。

于黄病毒间抗体的广泛交叉反应，一份可疑标本必须结合临床表现、流行病学资料、其他方法检测结果等才能作出准确诊断；另外，对于登革热而言，由于 lgM 抗体可在体内维持几个月时间，阳性的 IgM 检测结果并不能说明是登革病毒近期感染，也可能是几个月前感染时残留下来的。