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衣原体致输卵管炎模型

相关实验:输卵管炎 (盆腔炎)动物模型

最新修订时间:

简介

衣原体致输卵管炎模型是根据沙眼衣原体是性传播性疾病最常见的病因之一,女性感染沙眼衣原体后,可逆行感染导致输卵管急性和慢性炎症改变。

用途

口袋模型可根据实验需要在术后不同时间切开单个口袋,口袋内移植物可用于组织病理检查,培养分离病原体及血清抗体等检查。输卵管重复感染模型类似妇女远端输卵管疾病,其不孕的发生率可达 50% 以上,而单次感染不孕率在 15% 以下。因此该模型对研究输卵管继发不孕的发病机制具有重要作用,该模型同时也适,用于衣原体感染机制及其免疫动力学研究。是否切除卵巢并同时进行激素替代处理根据研究目的而定。

材料与仪器

试剂:衣原体体外培养及感染液。

步骤

衣原体致输卵管炎模型的基本过程可分为如下几步:

A. 衣原体体外培养及感染液制备;用衣原体如 MoPn 株(如 VR123)感染 MeCoy 细胞,在含有 10% 胎牛血清的 1640 培养液中培养,收集单层感染的 MeCoy 细胞,超声碎解细胞 30 秒,在 4 ℃ 下,500 x g 离心 10 分钟,吸取上层液,4 ℃,30000 x g 离心 45 分钟,取沉淀,悬浮于培养液(如 HeLa229 细胞培养液)中,分装后于 - 70 ℃ 保存。

B. 诱导方法如下:

(1)输卵管经阴道致炎模型:雌性小鼠麻醉后,用 0.1% 新洁尔灭消毒外阴,再用生理盐水清洗,取含 104~107 IFU 的衣原体感染液 50 μl,用 1 ml 无菌注射器(针头套硅胶硬外麻套管)通过阴道内接种感染。

(2)输卵管炎的口袋模型:猴在麻醉条件下进行剖腹术,手术时切除卵巢,同时用一长 3 em、充满雌二醇结晶的硅化胶囊埋植于皮下,以维持一定的血清 E2 水平,并每个月测量血 E2 含量。暴露输卵管将输卵管伞端切成小片段,并将这些伞端片段移植于猴前腹壁制作的皮下口袋内(口袋直径 4-6 mm)。皮下移植切口通常需 1 个月愈合,此时已建立好的口袋隆起于前腹壁。每个口袋接种 7x 106 个包涵体形成单位,接种病菌后注意观察炎症反应的发生。

(3)输卵管重复感染模型:选择具有生殖能力的雌性猴单独喂养。将沙眼衣原体(如:F/UW-6/CX.D/UW-3/CX.J/UW.-36/CX 等菌株)按每亳升(2~4)x 108 个包涵体形成单位接种于 HeLa229 细胞培养液中,分装冻存。动物麻醉后作下腹中线切口开腹,暴露输卵管,将 0.2 ml 接种物直接注入每根输卵管壶腹部的伞端口内,以后每个月接种 1 次(每次手术选择在月经中期),连续 3 次,后 2 次可接种同种型病原体,也可根据研究需要接种异种型病原体。

注意事项

口袋模型的制作较容易,一个动物能制作数个输卵管炎模型,可多次反复取材。而输卵管内直接接种病菌导致的输卵管炎常引起严重、不可逆粘连、因而不可能多次重复剖腹取材。输卵管伞端皮下移植物约 80% 可存活,且能血管化,一且血管形成,输卵管移植物将随血清雌、孕激素周期变化而肿大或缩小,与正常输卵管在月经周期中的变化一致。

来源:丁香实验

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