甲氨蝶呤免疫抑制小鼠鲍曼不动杆菌感染肺炎动物模型

微创微量气管直接注射法建立的感染模型以小鼠死亡为主， 肺部感染模型成功率高。

超声雾化法建立的感染模型可以模拟临床感染性肺炎的整个过程， 相似性。 重复性、可靠性， 适用性和可控性均较高， 且操作简单， 可以同时大批量操作， 实用性强。

微创微量气管直接注射法建立的感染模型以小鼠死亡为主， 肺部感染模型成功率高， 但不利于鲍曼不动杆菌肺部感染的病理过程和泛耐药菌株感染的抗感染治疗的研究。

超声雾化法建立的感染模型可以模拟临床感染性肺炎的整个过程， 相似性。 重复性、可靠性， 适用性和可控性均较高， 且操作简单， 可以同时大批量操作， 实用性强， 利于临床用药研究。

器材：雄性小鼠、眼科手术器械

试剂：

① 甲氮蝶呤 0.2 mg/d

② 10％ 水合氯醛

③ 生理盐水

甲氨蝶呤免疫抑制小鼠鲍曼不动杆菌感染肺炎动物模型的基本过程可分为如下几步：

A. 造模菌株为常规分离的鲍曼不动杆菌 （菌液浓度为 108 efu/ml）， 造模动物选用 4 周龄 BAL.BC 清洁级雄性小鼠， 体重 13～14 g。

B. 小鼠连续 2 日予甲氮蝶呤 0.2 mg/d 经腹腔注射。3 日后再经腹腔注射 10％ 水合氯醛 0.05 ml 麻醉，运用微量气管注射法或超声雾化感染法致肺部鲍曼不动杆菌感染， 菌液量均为 0.05 ml。

C. 微量气管注射方法：小鼠麻醉后，用眼科手术器械分析暴露气管， 然后用微量注射器直接注射细菌或生理盐水， 注射完毕后立即垂直悬挂小鼠 10 分钟， 然后再缝合创口， 正常分笼喂养。

D. 超声雾化感染方法：将小鼠麻醉后， 置 1 个有 2 个口的塑料容器中， 另将浓度为 108 CFU/ml 菌液置超声雾化器中， 以 2 ml/min 雾化速度开启雾化器， 雾化管接入塑料容器其中 1 个人口， 然后从另外一端的出口排出， 雾化 30 分钟。 所有操作均在生物安全柜中进行。

E. 监测小鼠感染率、死亡率、细菌清除率及肺部病理变化。

微量气管注射法。 超声雾化法感染免疫力低下的 BALB/C 小鼠的肺部感染率均为 100％（30/30）。 死亡率分别为 100％ 10/10），33％（3/10）。小鼠肺部细菌感染 Ⅱ 2～24 小时后支气管周及肺泡间质内见中性粒细胞、淋巴细胞。 巨噬细胞为主的炎症细胞浸润。微量气管注射法感染小鼠部分肺泡组织结构崩解， 肺泡腔内可见脓肿形成及较多细菌集落。超声雾化法感染小鼠 24 小时可见肺部部分区域存在细胞变性， 但支气管及肺泡组织结构基本正常， 肺泡壁血管轻度扩张伴淤血。2－4－48 小时后可见支气管和支气管周围变性， 部分肺组织血管高度扩张， 伴有水肿，48 小时后炎症逐渐恢复。