胚胎分割

胚胎分割（embryo splitting）是指运用显微操作仪将动物附植前的胚胎分割成二分、四分甚至八分胚的技术。

胚胎分割技术是研究细胞分化、早期胚胎发育和胚胎细胞全能性的重要手段，在发育生物学、动物生理学及生产实践中有着广泛的应用。通过分割胚胎，可以增加同质胚胎的数量，提高家畜产量和优良品种的推广速度。

胚胎分割技术也为细胞核移植、胚胎性别鉴定、胚胎嵌合等提供了获取卵裂球的方法和手段。

胚胎分割的原理是哺乳动物的早期胚胎具有不同程度的发育调节能力，即去掉或破坏部分胚胎后，剩余部分通过调节其发育方向继续成为一个完整的个体；而人为地将两枚早期胚胎融合在一起，二者通过细胞间的重塑机制，仅能发育为一个完整的胚体。

这说明哺乳动物早期胚胎的发育过程是调整型的，越早期其调整幅度越大，但是随着胚胎发育的进行，细胞的发育方向慢慢得到固定，直到最终调整能力完全丧失。

器材：

试剂：

胚胎分割的基本过程可分为如下几步：

（一）胚胎分割器具的准备

（1）显微分割：在进行胚胎分割之前需要制作持卵针和分割针，持卵针要求末端钝圆，外径与所固定胚胎直径相近，内径一般为20-30 μm。

（2）分割针目前有玻璃针和显微刀两种，玻璃针一般用实心玻璃棒拉成，其尖端要求弯成镰刀型；显微刀是用锋利的金属刀片与细玻璃棒粘在一起制成。

（二）胚胎的预处理

胚胎在分割前用0.2％ ～0.5％ 的链霉蛋白酶进行短时间处理，待透明带软化并变薄后，将胚胎移至添加牛血清白蛋白的培养液中。

（三）胚胎分割

将经过处理的胚胎与少量培养液一起置于一次性培养皿上，在显微操作仪下，将持卵针安装在左侧操作臂上，将分割针安装在右侧操作臂上，通过操作台来控制左、右操作臂。

调节左侧操作臂的粗调，使其接近胚胎并处于最佳的操作角度，再调节显微注射器负压，使持卵针吸引并固定住即将分割的胚胎。

另一侧的分割针调节至胚胎的正上方并将分割针慢慢往下降，然后自胚胎的等分线向下移动，把胚胎轻轻压住，当针接触到培养皿底时，稍加来回移动，即可将胚胎一切为二。

为提高切割胚胎移植的妊娠率和利用率，分割后的胚胎可以放入空透明带中，或者用琼脂包埋移入中间受体在体内培养或直接在体外培养。

（五）分割胚胎的保存和移植

（1）冷冻保存方法是保存于-196 ℃的液氮中。为提高冷冻胚胎的移植受胎率，分割胚胎需要在体内或体外培养到桑椹胚或囊胚阶段再进行冷冻。