简介
哺乳动物嵌合体(chimera)是指由两个或两个以上具有不同遗传性的细胞组成的聚合胚发育而成的个体。嵌合胚内不同来源的细胞相互调节、相互作用以至共同完成胚胎发育。
由于嵌合体能携带适当的遗传标记并能在个体发育中表现出来,因而它成为研究哺乳动物个体发育最有利的实验材料和遗传研究模型。
材料与仪器
器材:
①注射器
②玻璃微针
③光照条件为8:16(光照:黑暗)小时的环境清洁级动物饲养室
试剂:
①材料:家兔
②蛋白酶
③0.1% EDTA的无Ca,Mg2Hanks溶液
④hCG
步骤
家兔嵌合体技术的基本过程可分为如下几步:
1.从子宫内获取供体胚胎,用蛋白酶去掉所冲出胚胎的黏蛋白层和透明带。
2.用自制的玻璃微针将其切割为二份,一半含ICM以及少量滋胚层细胞,一半只含滋胚层胞。
3.将含ICM的半胚置于含0.25% 胰蛋白酶和0.1% EDTA的无Ca,Mg2Hanks溶液中,并用微细管轻轻吹打几遍,即可得到分离的ICM细胞。
4.将交配后96小时和120小时的ICM细胞分别注射到96小时的受体胚泡腔内,每个受体胚内注射10-15个细胞。
5.选用与受体胚胎同步的自然发情母兔,静脉注射50 U的hCG作为假孕兔。
6.注射后的胚泡移至假孕兔子宫内。
来源:丁香实验