简介
原始生殖细胞（生殖嵴）碱性磷酸酶染色可以特异地表现胚胎期原始生殖细胞的定位和数量，是经典的胚胎期生殖细胞常规分析方法。
材料与仪器
器材：
SPF 级别实验动物饲养环境、检栓针、立体显微镜
试剂：
① PBS 缓冲液
② 4% 多聚甲醛
③ Naphthol AS-MX stock（- 20 ℃，Sigma，货号 855-20ml）
④ Fast red TR（4 ℃，Sigma，货号 F8764-1g）
⑤ 70% 乙醇
⑥ 70% 甘油
步骤
生殖嵴碱性磷酸酶染色的基本过程可分为如下几步：
A 实验用雄性小鼠和雌性小鼠合笼，之后每天早上 10 点钟之前到动物房，对实验组和对照组雌性小鼠检测阴道内是否有阴道栓，以验证是否有交配行为。记录见栓情况。见栓后，将雌性小鼠编号取出，胚胎期 11.5 天和胚胎期 14.5 天的时候取出胚胎进行分析。
B 取出胚胎置于预冷 PBS 中，立体显微镜下取出生殖嵴。生殖嵴一般位于胚胎下肢内侧，脊椎两侧，与中肾相连。
C 将取出的生殖嵴用 4% 多聚甲醛 4 ℃ 固定 1～2 小时。去离子水洗 3 次，每次 3 分钟。
D 加入新鲜配制的 AP 染液（Naphthol AS-MXstock lg，Fast red TR 40 μl，millQ 1 ml 完全溶解，配制的量根据实验需要而定）染色 10 分钟左右，期间注意观察染色情况，出现明显的染色即可停止。
E 去离子水洗 3 次，每次 3 分钟。
F 70% 甘油透明后观察和拍照，正常的生殖嵴染色结果如下（E13.5d，bar ＝ 0.1 mm，红色代表生殖嵴，外侧组织为中肾）。结果示例如图 8-6-5 所示。
注意事项
生殖嵴分析一般选择胚胎期 11.5 天到胚胎期 14.5 天的小鼠胚胎。操作过程要小心谨慎，以防破坏组织。AP 染液需现配现用。
来源：丁香实验
