龋病动物模型

龋病动物模型能真实地模拟口腔环境，控制实验条件，缩短实验周期，客观反映龋齿的发生过程，为龋病学的研究提供了重要的方法。因此，利用动物实验研究龋病发生发展过程中和各种因子的相互关系、细菌的致病力及食物的致病性具有重要意义。

龋病是一种以细菌感染导致牙破坏为主的多因素疾病，通常其致病因素包括细菌、食物和宿主。细菌中变形链球菌、唾液链球菌和发酵链球菌起着主要作用；食物中重要的是淀粉和蔗糖，一方面它是宿主动物的营养来源，另一方面它能给口腔微生物提供营养；宿主因素中牙的发育状况及唾液量和性质对龋病的发生影响显著。因此，龋病动物模型主要围绕这三大因素复制。

器材：

① 鼠类啮齿动物和灵长类动物，常用的有大鼠、仓鼠、小鼠等

② 金刚砂片

试剂：

① 变形链球菌

② Keyes 2000#（56% 蔗糖、6% 全麦粉、28% 精炼奶粉、3% 苜蓿粉、1% 脱水全肝粉、4% 酵母、2% 盐）

③ 氨苄西林（浓度分别为 4000 U/ml 和 4 mg/g）

④ MSB 固体培养基

⑤ 2% 氢氧化铵溶液

⑥ 0.4% 紫脲酸铵染液

以大鼠为例，建立龋病定菌鼠模型的方法。龋病定菌鼠模型的基本过程可分为如下几步：

1、选取 18～20 日龄 Wistar 大鼠（雌雄均可），随机分组。适应性喂养 2 天，鼠龄 20～22 日，在饮水和饲料中分别加入氨苄西林或复合抗生素（氯霉素、氨苄西林、羧苄西林各 1 g/L 和 1 g/kg）的致龋饲料 Keyes 2000#。

2、 3 天后在大鼠牙面连续接种新鲜培养 18 h 的变形链球菌，浓度为 2 × 10⁹ CFU/ml，每只大鼠口腔用棉签涂拭菌液 0.2 ml，涂拭菌液后 1 小时内禁食，30 分钟后再接种 1 次。

3、鼠龄 56～63 天时处死大鼠，断颈。分离上下颌骨，于 2% 氢氧化铵中浸泡 30 分钟，清洗后干燥，置于 0.4% 紫脲酸铵染液 12 小时，清水冲洗后室温自然干燥，避光保存。金刚砂片沿上下颌磨牙颌面近远中向矢状片切，用清水洗净残屑，室温下自然干燥。

致龋饲料 Keyes 2000# 喂养至实验结束。细菌接种前后，用无菌棉签采集大鼠口腔内牙菌斑样品，经 MSB 固体培养基以确定接种。根据 Keyes 评分标准，在体视显微镜下分别记录每只大鼠釉质龋（E）、牙本质浅龋（Ds）、牙本质中龋（Dm）的情况进行评分并且评价邻面和咬合面。