大鼠胚胎移植

胚胎移植俗称人工授胎或借腹怀胎，是指将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物体内，使之继续发育为新个体的技术。

本质上即生产胚胎的供体和孕育胚胎的受体共同繁殖后代的过程。利用胚胎移植技术可以充分发挥雌性优良个体的繁殖能力。

器材：

⑤37 ℃，5％ CO₂培养箱

试剂：

胚胎移植的基本过程可分为如下几步：

一、胚胎移植假孕受体的制作

（一）雄性大鼠的输精管结扎

1. 雄性大鼠麻醉后，腹部向上，腹部 75% 乙醇消毒，在睾丸附近腹中线处开一小口。

2. 用镊子夹住脂肪垫将睾丸拉出；用精细镊子在睾丸附近找出输精管，用另一把镊子撕掉周围的结缔组织。

3. 将一把镊子在输精管内侧自然张开裸露输精管，另一把镊子将输精管镊住固定，用烧红的镊子分别在两侧烧灼将输精管切断；烧灼以后输精管的两断口均形成密封口，切下的一段丢弃。

（二）假孕受体的制作

2. 将发情雌性大鼠与同品系输精管结扎雄性大鼠进行交配；次日见栓记为 0.5dpc。假孕见栓 0.5dpe 可用于大鼠发育各阶段胚胎的胚胎移植，假孕见栓 3.5dpc 仅用于大鼠囊胚移植。

（三）电动按摩器诱导大鼠假孕

1. 挑选 8 周龄的健康性成熟雌性大鼠，挑发情；磁性电动按摩器音频为 10～20kHz，在按摩器顶端用胶布固定一长约 8～10 cm，直径 2～3 mm 的钝头玻棒。用改装的电动按摩器，于上午 9～10 时，刺激发情期动物的阴道。将电动玻棒头插入阴道 2～2.5 cm 处，相当于子宫颈外口处，打开电源刺激阴道 60～180 秒。

二、胚胎移植

（一）各时期大鼠胚胎的获取

1.对雌性大鼠进行超数排卵处理；见栓记为 0.5dpc，取 2-细胞期胚胎通常在交配后 28～32 小时；取 4-细胞期胚胎通常在交配后 36 - 48 小时。

2. 取 8-细胞期胚胎，在交配后 56 小时左右；囊胚在 3.5 天；取交配后相应时间的大鼠，用颈椎脱臼方法处死，仰卧固定于实验台上，用乙醇喷雾小鼠腹部，进行表面消毒。

3. 打开腹腔，连同子宫一起采取输卵管，再剪下输卵管准备灌流。一般用带有 26～30 号针头的 1 ml 注射器，吸取含有 HASE 的 HERs 培养基 300 μl 进行输卵管灌流，灌流后带有胚胎的培养基滴入培养皿中。挑选发育时期准确且发育状态良好的胚胎，移入事先准备的新鲜的 200 μl 的 M2 培养液液滴中，每个液滴中移入 20 枚左右的胚胎。在 M2 中清洗后的胚胎移入大鼠胚胎培养液 mRIECM-2C 并放入 37 ℃，5% CO₂ 培养箱中培养。

（二）胚胎的输卵管内移植

1.腹腔注射浓度为 0.05 g/ml 的水合氯醛溶液（每只 1.5～2.0 ml）对假孕大鼠进行全身麻醉，大约 10 分钟后大鼠处于完全麻醉状态。

2. 卧位固定于超净手术台上，剃毛后在背部体侧剪口，找到输卵管/子宫并将其拉出。在毛细移液管（外径 200～250 μm）内间隔 2 - 3 mm 交替吸入培养液和空气泡，然后再吸入 10 个左右的胚胎。

3. 取一个精细钟表镊和一把鼻科剪刀，在输卵管伞部与膨大部之间剪一小口，在切口部插入吸入胚胎的毛细移液管，一直插到输卵管的膨大部。

4. 用精细镊子固定住插入毛细移液管的输卵管开口部。将毛细管内的胚胎和空气泡吹入输卵管膨大部；轻缓地取出毛细移液管。移植后将子宫、输卵管小心放回大鼠腹腔中，并进行手术缝合，伤口涂红霉素软膏抗感染。

5. 术后假孕鼠需放置在 37 ℃ 热台上恢复，大约 30 分钟后大鼠自然苏醒。

（三）子宫内移植

1.腹腔注射浓度为 0.05 g/ml 的水合氯醛溶液（每只 1.5～2.0 ml）对假孕大鼠进行全身麻醉，大约 10 分钟后大鼠处于完全麻醉状态。

2. 卧位固定于超净手术台上，剃毛后在背部体侧剪口，找到输卵管/子宫并将其拉出。在毛细移液管（外径 200～250 μm）内间隔 2～3 mm 交替吸入培养液和空气泡，然后再吸入 10 个左右的胚胎。

3. 利用口吸管将待移植的大鼠囊胚注入 3.5 天假孕鼠子宫角中，轻缓地取出口吸管。

4. 移植后将子宫、输卵管小心放回大鼠腹腔中，并进行手术缝合，伤口涂红霉素软膏抗感染。