简介
细胞计数法是细胞生物学实验的一项基本技术,在原代培养、传代培养、冻存及复苏等实验中,被广泛用来确定培养细胞生长状态及接种密度,此外,也是测定培养基、血清、药物等物质生物学作用的重要手段。
原理
细胞的计数实验的基本原理是利用细胞计数板可对细胞进行计数。
细胞计数板每一大方格长为 1 mm,宽为 1 mm,高为 0.1 mm,体积为 0.1 mm3,可容纳的溶液是 0.1 μL,那么每 1 mL 溶液中所含细胞数即是视野中每一大方格中数出的细胞数的 10000 倍。(如下图)。
材料与仪器
器材:
① 盖玻片
② 吸管
③ 尖嘴吸管
④ 胶帽
⑤ 离心管
⑥ 酒精棉球
⑦ 酒精灯
⑧ 细胞计数板
⑨ 倒置显微镜
⑩ 超净工作台
⑪ CO2 培养箱
试剂:
① D-Hanks 液
② 0.25% 胰蛋白酶液
③ DMEM 培养基
步骤
显微测微尺测量细胞显微大小实验基本过程可分为以下几步:
A. 用 75% 乙醇棉球清洁计数板和盖玻片,用吸水纸轻轻擦干,用 10x 物镜观察计数板四角大方格,调节焦距使视野清晰后,将盖玻片盖在计数板两槽中间。
B. 用 0.25% 胰蛋白酶液消化传代 7 d 的单层生长的成纤维细胞,制成单细胞悬液。
C. 用尖嘴吸管轻轻吹打细胞悬液,吸取少量悬液滴加在计数板上盖玻片一侧边沿。
D. 在显微镜下,用 10x 物镜观察计数板四角大方格中的细胞数,细胞压中线时,只计左侧和上方者,不计右侧和下方者。
注意事项
1. 细胞计数前,为了使结果更为准确,对细胞的消化要充分,使其尽量分散,以制备单细胞悬液。加样前应充分混匀细胞悬液,加样时应避免气泡的产生,加样量要适度,不要溢出盖玻片,也不要过少或带气泡。
2. 镜下计数时,遇到 2 个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算。如细胞团占 10% 以上,说明消化不充分,需重制备细胞悬液、计数。
来源:丁香实验