神经胶质细胞的培养实验
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简介
神经胶质细胞的培养实验是指在体外条件下对神经胶质细胞进行大量培养。
原理
神经胶质细胞的培养实验的基本原理是由于神经胶质细胞在体外的条件下，可稳定地生长，并发生分裂、增殖，因此，较易培养成功并可进行传代。
材料与仪器
器材：
① 新生大鼠（1 周内）吸管
② 眼科剪
③ 眼科镊
④ 培养瓶
⑤ 培养皿
试剂:
① D-Hanks 液
② DMEM 培养基（含 10％ 胎牛血清）
步骤
神经胶质细胞的培养实验基本过程可分为以下几步：
A. 取新生大鼠（1 周内）1 只，将其处死，于无菌条件下取出脑组织。
B. 在解剖显微镜下，将脑膜及血管等纤维成分尽量剥除干净。
C. 用 D-Hanks 液冲洗脑组织 3 次，将髓质切除，保留皮质。
D. 将皮质剪成 1 mm3 的小块，置于盛有 30～50 倍 D-Hanks 液的离心管中，反复轻轻吹打皮质组织块，制备细胞悬液。
E. 将离心管静置 5～10 min，细胞或细胞团块将自然下沉、脂肪等杂物则漂浮于上层。
F. 轻轻将离心管中悬液的上层吸出，于 1000 r/min 条件下离心 5 min，弃上清液。
G. 加入 DMEM 培养基，吹打沉淀，制备细胞悬液。
H. 对细胞进行计数，按 0.5 x 106 个/ml 的细胞密度接种细胞于培养瓶中。
I. 静置培养 30 min 后，轻轻吸出含未贴壁细胞的培养液，于 1000 r/min 离心 5 min，弃上清液。
J. 向上述离心后的沉淀加入培养液，吹打制悬。
K. 将细胞接种于培养瓶中，每 2～3 d 换液 1 次。
注意事项
1. 脑膜及血管等纤维成分要尽量剥离干净，否则培养的细胞中将有成纤维细胞、内皮细胞及巨噬细胞等的混杂。
2. 根据神经胶质细胞贴壁过程较慢的特点，利用反复贴壁法，既可促进神经胶质细胞贴壁生长，又可减少其他类型细胞的污染。
3. 在培养 9～10 d 后，单层生长的星形胶质细胞的上面常可出现一些少突胶质细胞，此时可将培养瓶放于恒温振荡器中，于 37 ℃ 水浴振荡 15～18 h，少突胶质细胞将会发生脱落，由此可得到纯度较高的、贴壁的星形胶质细胞。
来源：丁香实验
