用碱水解和氯甲苯活化的固定化实验

用这种方法酯键通过碱的处理被部分水解，用溶在丙酮中的对甲苯磺酰氯化物来活化，用羧基或羟基固定化酶到这个残基上（图 1）。

图 1　通过氯化物的活化酶固定化到聚酯上

酶溶液
磷酸钾 NaCl NaOH 丙酮 对甲苯磺酰氯化物
吸滤器 玻璃料 聚酯小片

实验所需「试剂」具体见「其他」

1. 通过氯化物的碱解和活化

聚酯小片（每片 2 cm²，10 片）在室温 10 ml 10％（质量浓度）NaOH 中孵育 10 min，其后聚酯在玻璃料上被充分冲洗和吸干，用水冲三次，再用丙酮冲五次，每次 10 ml。

冲洗后尚未干，小片立即转移到 10 ml 溶有 100 g/l 甲苯磺酰基氯化物的丙酮中孵育 20 min。其后在玻璃料上用丙酮冲洗三次、水冲洗三次、pH 7.5 的 0.1 mol/L 磷酸钾两次，每次 10 ml。

2. 酶的固定

冲洗之后迅速添加酶溶液（大约 10 ml，聚酯小片必须完全沉浸）并在 4℃ 温和的摇动中过夜。未结合的酶在吸滤器或玻璃料上先用溶有 0.5 mol/L NaCl 的 pH 7.5 0.1 mol/L 磷酸钾冲洗，再用 pH 7.5 0.1 mol/L 磷酸钾来冲洗，其后，储存在缓冲液中，为了储存更长的时间，可用水冲洗去除聚酯小片上的缓冲液，并在空气中干燥。

试剂：

0.1 mol/L pH 7.5 磷酸钾

溶有 0.5 mol/L NaCl 的 0.1 mol/L pH 7.5 磷酸钾

100 g/L NaOH

丙酮

溶有 100 g/l 对甲苯磺酰氯化物（Mr＝190.7）的丙酮