邻氨基苯甲酸合成酶的测定实验
最新修订时间:
原理
分支酸+L-谷氨酰胺 → 邻氨基苯甲酸+丙酮酸+L-谷氨酸。
分支酸丙酮酸-裂解酶(氨基-受体)是含苯环氨基酸生物合成中的一个重要酶,起始苯丙氨酸生物合成分支。分支酸非常不稳定需要保存在 -70℃。Gibscm(1964)已经描述了分支酸的分离方法。
<link />材料与仪器
分支酸丙酮酸-裂解酶
分支酸 谷氨酰胺 MgCl2 二硫赤藓糖醇
荧光光度计
步骤
实验所需「试剂」具体见「其他」
37℃,激发 325 nm、发射 400 nm 处测定荧光。
注意事项
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常见问题
试剂:
10 mmol/L 分支酸(Mr=361.5,钡盐,18. 1 mg 溶于 5 ml H2O 中)
0.2 mmol/L 谷氨酰胺(Mr=146.2;292 mg 溶于 10 ml H2O 中)
0.1 mol/L MgCl2(Mr=203.3;2MgCl2·6H2O,03 mg 溶于 10 ml H2O)
0.1 mol/L 二硫赤藓糖醇(DTE,Mr=154.2;154 mg 溶于 10 ml H2O 中)
<link />来源:丁香实验