基本方案
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原理
在酶测定中二氧化碳的释放可以用压力计或 14C1-丙酮酸盐测定。在此将描述一个与ADH 有关的实验。
材料与仪器
酶样品
柠檬酸缓冲液 丙酮酸 焦磷酸硫胺素 MgCl2 NADH ADH
分光光度计
柠檬酸缓冲液 丙酮酸 焦磷酸硫胺素 MgCl2 NADH ADH
分光光度计
步骤
实验所需「试剂」具体见「其他」
0.98 ml 实验混合物
0.02 ml 酶样品
记录 340 nm、25℃ 处吸光值的减少,ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。
常见问题
试剂:
0.2 mol/L 柠檬酸缓冲液,pH 6.0
1 mol/L 丙酮酸(丙酮酸钠,Mr=110.0;1.1 g 溶于 10 ml H2O)
0.01 mol/L 焦磷酸硫胺素(ThDP,脱竣辅酶,Mr=460.8;46.1 mg 溶于 10 ml H2O)
0.1 mol/L MgCl2(MgCl2·6H2O,Mr=203.3;203 mg 溶于 10 ml H2O)
0.01 mol/L NADH(二钠盐,Mr=709.4;71 mg 溶于 10 ml H2O)
ADH 来自酵母(20 mg/ml)
来源:丁香实验