花粉萌发与花粉管生长的观察实验

花粉
染液
培养皿

1 花粉的体外萌发试验

在花粉萌发和花粉管伸长的体外试验中，常用的培养某是蔗糖溶液或含蔗糖的琼脂培养基。各种植物的花粉萌发要求的蔗糖质虽浓度不同，一般为 2%-20%, 某些水生植物的花粉在蒸馏水中有更高的萌发率。培养基中加人 0.01%的硼酸，对多数植物花粉萌发都有促进什用。有些植物的花粉要在加有蔗糖的明胶培养基上才有较好的萌发效果。

用液体培养基时，由于花粉沉降而导致萌发不计，可以采用悬滴培养法，也可以采用玻璃纸作为支传物来进行花粉萌发。使用琼脂培养基时，培养某倒在凹玻片上或者小培养皿中，使于在显微镜下观察。

在研究花粉萌发时，首先应采用不同浓度的蔗糖、硼酸的组合配制培养基，从中筛选适当的配方。花粉粒放入培养基后，应选择在最适温度下培养'一般情况下，花粉在培养基上培养数十分钟至数小时即可观察到其萌发出花粉管，实验过程应确定在培养了一致的时间后开始统计萌发率。－般将花粉管长度超过花粉直径 2倍以上判定为己萌发，计算已萌发花粉在视野中全部花粉中的百分比，每组实验材料统计 20个或更多视野为宜。

2 花粉管生长途径的荧光显微观察

在花粉粒及花粉管的研究中，经常使用荧光显微术。用荧光染料苯胺蓝可以使花粉管壁及花粉管的胼胝质塞染色，而在紫外线或篮紫光下呈鲜黄色或黄绿色。观察被子植物雌蕊中花粉管牛长通常的步骤是：授粉后的雌蕊以 FAA 固定液固定， 5%的氢氧化钾或氢氧化钠离析和透明至适度（ 一般需1h 或更长时间），蒸馏水漂洗 3 次，取适量材料于载玻片上，滴加 1-2 滴苯胺蓝染液（水溶性苯胺蓝 0.lg, 溶于1/30mol/L 磷酸钾溶液 100mL,避光、冷藏保存至近无色。）染色约1h, 加 50%甘油 1 滴，盖上盖玻片，必荌时施以轻压。把这样处理后制作的压片用荧光显微镜进行观察，在篮紫光下雌蕊组织中的花粉管呈现很强的荧光，很便于观察。

另外，在不使用荧光显微镜时，也有只使花粉管染色的方法：授粉后的雌蕊在酒精－三氯甲烧－醋酸 (3：4：1)溶液中固定 30min, 在 70%酒精、 50%酒精、 30%酒精、蒸馏水中逐一浸泡 2min 后取出，用苯胺蓝－藏红 O 染液（水溶性苯胺蓝 0.75g, 藏红 00.25g, 溶于加热的 45%醋酸，过滤）染色，然后，在 45%醋酸溶液中透明 1 h, 以乳酸酚封片。于显微镜下观察，花柱组织染成极浅的紫色，而花粉管染成深蓝色，容易区分。