pH 稳定计法
最新修订时间:
原理
材料与仪器
胆碱酯酶
Tris-HCl 氯化乙酰胆碱 氯化镁 NaOH
自动滴定器
Tris-HCl 氯化乙酰胆碱 氯化镁 NaOH
自动滴定器
步骤
空白对照:保持 pH 7.4,持续记录几分钟每次 0.01 mol/L 氢氧化钠的用量。
样品:加入酶溶液(例如 0.1~1 ml),保持 pH 7.4,并记录 5 min 每次 0.01 mol/L 氢氧化钠的用量。
计算 25℃ pH 7.4 时,每分钟一个单位水解的 1 umol 乙酰胆碱。
常见问题
试剂:
0.02 mol/L Tris-HCl,pH7.4
2.2 mol/L 氯化乙酰胆碱(Mr=181.7;40 g 溶于 100 ml 水中,碘化丁酰胆碱,Mr=301.2)
0.2 mol/L 氯化镁(MgCl2·6H2O;Mr=203.3;4.1 g 溶于 100 ml 水中)
0.01 mol/L 氢氧化钠标准溶液作为滴定剂,加入自动滴定器的滴管中
胆喊酯酶,溶于 H2O 中,1 mg/ml
来源:丁香实验