原理
神经纤维是由神经元的轴突和树突等成分组成,经过银染后,再用还原剂处理,使银颗粒沉着于纤维和细胞中。常用 Bielschowsky 染色法。
材料与仪器
石蜡组织切片
硝酸银水溶液 无水乙醇 浓氨水 蒸馏水 二甲苯 乙醇 中性树胶 氯化金水溶液 甲醛 硫代硫酸钠
滤纸 37℃ 温箱
硝酸银水溶液 无水乙醇 浓氨水 蒸馏水 二甲苯 乙醇 中性树胶 氯化金水溶液 甲醛 硫代硫酸钠
滤纸 37℃ 温箱
步骤
氨银溶液:20% 硝酸银水溶液 30 ml,无水乙醇 20 ml。将此两液混合后呈现乳白色沉淀,逐滴加入浓氨水,使之形成的沉淀刚刚溶解,再滴加 5 滴浓氨水,过滤后使用。
1. 石蜡组织切片厚度 8~15μm,常规脱蜡至水。
2. 蒸馏水洗 1~2 min。
3. 2% 硝酸银水溶液在 37℃ 温箱内浸染 25~35 min。
4. 蒸馏水洗 2~3 min。
5. 用 10% 甲醛溶液还原数秒钟,至切片呈现黄色为止。
6. 蒸馏水洗 3 min,用氨银溶液滴染 20~40 s。
7. 倾去染液,直接用 10% 甲醛溶液再次还原 1~2 min,使之切片呈棕黄色。
8. 蒸馏水洗 3 min,0.2% 氯化金水溶液处理 3 min。
9. 蒸馏水洗 1 min,5% 硫代硫酸钠水溶液固定 3~5 min。
10. 水洗 3~5 min,然后用滤纸将切片周围水分吸干。
11. 无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
注意事项
1. 由于神经纤维的组织切片较厚,为防止脱片现象,所以最好用涂胶的载玻片进行捞片。
2. 氨银溶液作用后,切片上应保留些银液,便于甲醛还原,使纤维着色较深。
常见问题
结果:神经元、轴突及神经纤维呈黑色。
来源:丁香实验