由 NAD+还原反应测定 OGDHC 总活性的实验
最新修订时间:
原理
材料与仪器
OGDHC
磷酸钾 NAD+ 焦磷酸硫胺素 MgCl2 α-酮戊二酸 二硫赤藓糖醇 辅酶 A
分光光度计
步骤
实验所需「试剂」具体见「其他」
0.98 ml 实验混合物
0.02 ml 酶样品
37 ℃ 时,于 340 nm 处吸收值发生变化,ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。
注意事项
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常见问题
试剂:
0.1 mol/L 磷酸钾,pH 7.6
0.1 mol/L NAD+(游离酸,Mr=663.4;663 mg 溶于 10 ml 水中)
0.01 mol/L 焦磷酸硫胺素(ThDP,脱羧辅酶,Mr=460.8,46.1 mg 溶于 10 ml 水中)
0.1 mol/L MgCl2(MgCl2·6H2O,Mr=203.3,203 mg 溶于 10 ml 水中)
0.5 mol/L α-酮戊二酸(α-酮戊二酸盐,2-氧代戊二酸,二钠盐,Mr=190.1,0.95 g 溶于 10 ml 水中)
0.1 mol/L 二硫赤藓糖醇(DTE,Mr=154.2,或二硫苏糖醇,DTT,Mr=154.2;154 mg 溶于 10 ml 水中)
0.01 mol/L 辅酶 A(游离酸,Mr=767.5,CoA·Li3,Mr=785.4;23 mg 溶于 3 ml 水中)
<link />来源:丁香实验