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最新修订时间:

材料与仪器

酶样品
Tris-HCl CoA 乙酰磷酸 磷酸转乙酰酶 DL-二氢硫辛酰胺 HCl 羟胺 FeCl3 试剂

步骤

实验所需「试剂」具体见「其他」


0.98 ml 实验混合物


0.02 ml 酶样品


30 ℃ 培养 15 min,加入 0.1 ml 1 mol/L HCl 停止,沸水浴 5 min。而后 0.4 ml 的测定用量溶于 0.2 ml 2 mol/L 羟胺,并且室温下持续 10 min 后加入0.6 ml FeCl3 试剂。离心 5 min后测量 546 nm 吸收值。

常见问题

试剂:


0.1 mol/L Tris-HCl,pH 7.6


0.01 mol/L CoA(游离酸,Mr=767.5,CoA·Li3,Mr=785.4;23 mg 溶于 3 ml 水中)


1 mol/L 乙酰磷酸(LiK 盐,Mr=184.1;1.84 mg 溶于 10 ml 水中)


磷酸转乙酰酶(乙酰-CoA:正磷酸转乙酰酶,4000 U/ml)


0.2 mol/L DL-二氢硫辛酰胺


1 mol/L HCl


2 mol/L 羟胺(等量的 4 mol/L 羟胺,Mr=69.49 和 4 mol/L KOH,Mr=56.11混合)


FeCl3 试剂

100 ml 5% FeCl3(8.33 g FeCl3·6H2O,Mr=270.3,用 0.1 mol/L HCl 补充至 100 ml)

100 ml 12% TCA(三氯乙酸,Mr=163.4)

100 ml 3mol/l HCl(1:3 的比例混合 HCl 和 H2O

将三种溶液混合

来源:丁香实验

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