由 NAD+还原反应测定的 PDHC 总活性实验
最新修订时间:
原理
材料与仪器
PDHC
磷酸钾 NAD+ 二磷酸硫胺 MgCl2 丙酮酸 二硫代苏糖醇 辅酶 A
分光光度计
步骤
实验所需「试剂」具体见「其他」
0.98 ml 实验混合物
0.02 ml 酶样品
37℃ 时,在 340 nm 处吸收值发生变化。NADPH 的吸收系数 ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。
注意事项
常见问题
试剂:
0.1 mol/L 磷酸钾,pH 7.6
0.1 mol/L NAD+(Mr=663.4,游离酸;663 mg 溶于 10 ml 水中)
0.01 mol/L 二磷酸硫胺(ThDP,脱竣辅酶,Mr=460.8;46.1 mg 溶于 10 ml 水中)
0.1 mol/L MgCl2(MgCl2·6H2O,Mr=203.3;203 mg 溶于 10 ml 水)
0.1 mol/L 丙酮酸(丙酮酸钠,Mr=110.0;110 mg 溶于 10 ml 水中)
0.1 mol/L 二硫代苏糖醇(DTE,Mr=154.2,或二硫代苏糖醇、DTT,Mr=154.2;154 mg 溶于 10 ml 水中)
0.01 mol/L 辅酶 A(游离酸,Mr=767.5,CoA·Li3,Mr=785.4;23 mg 溶于 3 ml 水中)
<link />来源:丁香实验