过氧化氢酶的测定实验

H₂Ｏ₂：H₂Ｏ₂ 氧化还原酶。

H₂Ｏ₂ →Ｏ₂ + H₂Ｏ

这个绿色的酶有四个相同的亚基组成（Mr＝60 000）， 每一个亚基携带一个正铁血红素 IX 基团，这个基团处于高速旋转状态，核心是一个三价的铁。铁离子的四个配位位点被卟啉结构占据，第五个位点被蛋白质的组氨酸得到。第六个位点保持自由状态，但也有可能被氰化物或者氟化物这样的阴离子占据，并阻碍酶反应。氰化物结合后会减少铁移入卟啉环平面，高速旋转状态变为低速旋转状态，同时伴随着一种很大的光谱移动（回顾请查阅 Nicholls 和 Schonbaum，1963）。过氧化氢酶是被 Sumner（1937） 最早结晶的酶之一，并且由于它髙度的结晶倾向性，晶体悬浮液是首选的储存形式。酶底物的过氧化氢会在高浓度的时候破坏酶。因此，酶实验不能发生在底物饱和的环境下，而且 Km 也不能直接被动力学分析确定。在 405 nm 处酶的吸收系数为 38×10³ l/（mmol·mm）[9.5 l/（mmol·mm）每血红素基团]。

酶样品
H2Ｏ2 磷酸钾
分光光度计

实验所需「试剂」具体见「其他」

0.98 ml H₂Ｏ₂ 溶液

0.02 ml 酶样品（浓缩的原料用 0.05 mol/L 磷酸钾溶液 pH 7.0 稀释大约 2000 倍）

25℃ 在比色皿中测量的吸收值于 240 nm 处降低；ε₂₄₀＝4.0 l/（mmol·mm）。每分钟吸收值变化 0.04 相当于每分钟分解 1 umol H₂Ｏ₂，约 1 IU，约 16.67 nkat。

试剂：

0.05 mol/L 磷酸钾，pH 7.0

H₂Ｏ₂ 溶液（约 10 mmol/L）：0.06 ml 30％ H₂Ｏ₂ 稀释于 50 ml 0.05 mol/L 磷酸钾 pH 7.0 中，在 240 nm 处以缓冲液为对照的吸收值应该是 0.50±0.01.否则要用缓冲液或者 H₂Ｏ₂ 调节这个值。