与 3-磷酸甘油酸激酶(PGK)偶联的还原反应
最新修订时间:
原理
材料与仪器
三乙醇胺-NaOH 3-磷酸甘油酸 ATP NADH EDTA 硫酸镁
分光光度计
步骤
实验所需「试剂」具体见「其他」
0.98 ml 实验混合物
0.02 ml 酶溶液
25℃ 时,于 340 nm 处吸收值降低。NADPH 的吸收系数 ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。
注意事项
常见问题
试剂:
0.1 mol/L 三乙醇胺-NaOH pH 7.6(三乙醇胺-HCl,Mr=185.7;溶解 18.6 g 于 800 ml H2O 中,用 1 mol/L NaOH 调节至 pH 7.6,补充到 1 L)
0.1 mol/L 3-磷酸甘油酸(3-磷酸甘油酸,二氢盐,Mr=230.0;230 mg 溶于 10 ml 水中)
0.1 mol/L ATP(二钠盐,三水合物,Mr=605.2;605 mg 溶于 10 ml 水中)
0.01 mol/L NADH(二钠盐,Mr=709.4;71 mg 溶于 10 ml 水中)
0.1 mol/L EDTA(Mr=292.2;292 mg 溶于 10 ml 水中)
0.1 mol/L 硫酸镁(MgSO4 · 7H2O,Mr=246.5;247 mg 溶于 10 ml 水中)
3-磷酸甘油酸激酶,从酵母中提取(约 2000 U/mg)
来源:丁香实验