原理
乙醇 + NAD+ ⇌ 乙醛 + NADPH + H+
由于平衡易向正方向移动,逆反应的抑制必须加入碱性的 pH 试剂以及另一种试剂来捕捉乙醛,以便将产物从平衡中移走。
材料与仪器
甘氨酸-二磷酸钠溶液 磷酸钾 乙醇 NAD BSA 溶液 氨基脲
分光光度计
步骤
0.98 ml 实验混合物
0.02 ml ADH 稀释溶液
25℃ 时,于 340nm 处吸收值降低。NADH 的吸收系数 ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。
常见问题
试剂:
75 mmol/L 甘氨酸-二磷酸钠溶液 pH 9.0(10 g Na4P2O7· 10 H2O+0.5 g 甘氨酸溶于 300 ml H2O,用 1 mol/L HCl 调节至 pH 9.0)
0.1 mol/L 磷酸钾,pH 7.5
乙醇,p.A.(Mr=46.1,d=0.81 g/ml)
0.1 mol/L NAD(0.633 g 溶于 10 ml 0.1mol/L 磷酸钾,pH 7.5)
0.1mol/L 1,4-二硫代赤藻糖醇(DTE,Mr=154.3,154 mg 溶于 10 ml 0.1 mol/L 磷酸钾,pH 7.5)
0.1 g BSA 溶于 100 ml 0.1 mol/L磷酸钾,pH 7.5(BSA 溶液)
2.2 mol/L 氨基脲(Mr=11.5,2.5 g 氨基脲-HCl 溶于 10 ml 2mol/LNaOH,用 5mol/L NaOH 调节 pH 到 6.3~6.5)
ADH,稀释同前
来源:丁香实验