绒毛尿囊膜接种

绒毛尿囊膜接种常用于牛痘病毒、天花病毒、单纯疱疹病毒的分离，因为这些病毒在绒毛尿囊膜上可形成肉眼可见的斑点状或痘疱状病灶。另外，病毒可在绒毛尿囊膜上进行滴定，因为感染性病毒颗粒的数目可以通过产生的斑和痘的数目来计算。该方法还可用于抗病毒血清的滴定试验，即在有抗体存在的情况下，痘疱形成受到抑制。

1. 接种步骤与方法

(1) 将孵育 10~13 日龄的鸡胚放在检卵灯上，用铅笔划出气室、胎位，并于与胚胎略近气室端的绒毛尿囊膜发育较好的卵壳上划一等边三角形，每边 10 mm 。

(2) 用碘酒消毒气室顶端及绒毛尿囊膜记号处，并用开孔器在记号处的卵壳上开一三角形裂痕，不可弄破下面的壳膜，同时在气室顶端钻一小孔。

(3) 用小摄子轻轻揭去所开小窗处的卵壳，露出壳下的壳膜，在壳膜上滴一滴生理盐水，用针尖循卵壳膜纤维方向小心地划破一隙，但注意切勿伤及紧贴在下面的绒毛尿囊膜。

(4) 用针尖刺破气室小孔处的壳膜，再用橡皮乳头紧按气室小孔向外吸气，造成负压，此时盐水小滴即可自裂隙流至绒毛尿囊膜上，从而使绒毛尿囊膜下陷而形成人工气室。

(5) 用注射器通过卵壳的窗口滴 0. 05~0. 1 ml 病毒液于绒毛尿囊膜上，然后将鸡胚轻轻地旋转使接种物扩散到人工气室之下的整个绒毛膜尿囊膜上。

(6) 在卵壳的窗口周围涂上半凝固的石蜡，作成堤状，立即用消毒胶布封口。也可用揭下的卵壳封口，即将卵壳盖上，接缝处涂以石蜡，但石蜡不能过热，以免流人卵内。将鸡胚始终保持人工气室在上方的位置， 33~35℃继续培养 48~72 h 。

2. 解剖与收获

(1) 用 2. 5% 的碘酒和 75% 的酒精分别消毒人工气室上的卵壳，去除窗孔上的胶布。

(2) 将灭菌剪子插入窗内，沿人工气室的界限剪去卵壳及壳膜，露出绒毛尿囊膜，再用灭菌眼科摄子将膜正中夹起，用剪刀沿人工气室边缘将膜剪下，放人加有灭菌生理盐水的培养皿内，观察病灶形状或用于传代，或用 50%甘油保存。同时作无菌培养。