羊膜腔接种

 羊膜腔接种主要应用于从临床材料（如患者咳嗽液等）分离流感病毒等。这种接种途径可直接感染羊膜腔的内胚层，也可被鸡胚咽下或吸入，引起全胚胎感染。另外，病毒也可被排泄到尿囊腔中，使尿囊腔中含有大量病毒。因此，在用羊膜腔接种分离病毒时，除可收获羊水以外，还可收获尿囊液。 

1. 接种步骤与方法

(1) 将 10~12 日龄的鸡胚在检卵灯上照视，划出气室范围，并在胚胎最靠近卵壳的一侧做记号。

(2) 用 2.5%碘酒及 75% 的酒精分别消毒气室部位的蛋壳，并用开孔器在气室顶端钻出一约10 mmX6 mm 的长方形裂痕，注意勿钻破壳膜。

(3) 用 2. 5%碘酒再次消毒钻孔区后，用灭菌的眼科小镊子除去长方形卵壳和外层壳膜，并滴加灭菌液体石蜡一滴于下层壳膜上，使其透明，以便观察胚胎的位置。

(4) 将注射器刺向胚胎的腭下胸前，以针头拨动下颚及腿，当进入羊膜腔内时，可看到鸡胚随针头的拨动而动，此时可注入0. 1-0. 2 ml 病毒液。

(5) 拔出针头，孔区用 2. 5%碘酒消毒，然后用沾有碘酒通过火焰的小块胶布将卵壳的小窗口封住，并于 33---35℃孵卵器内孵育 48-72 h比此过程要保持鸡胚的钝端朝上。

2. 解剖与收获

(1) 收获前鸡胚须置 4℃冰箱 6h 或过夜，但不能放置时间过长（过长会引起散黄）。如急于收获亦可置- 20℃ 冰箱1 h 左右。预冷的目的是，将鸡胚冻死，使血液凝固，避免收获时流出红细胞，并同尿囊液的病毒发生凝集，造成病毒滴度下降。

(Z) 用 2. 5%碘酒和 75%酒精分别消毒气室处的卵壳，并用灭菌剪刀剪去气室部的卵壳，此时勿使其碎片落于未损伤的壳膜上。用无菌毛细吸管吸取尿囊液，然后左手持小镊子夹起羊膜成伞状，右手用毛细吸管插入羊膜腔吸取羊水，平均每胚可收获 0. 5~1. 0 ml 羊水。

(3) 病毒通过胚胎机体后被排泄人尿囊腔，因此当羊水过少时，可用同胚少量尿囊液冲洗羊膜腔并吸取该洗液。

1. 防止污染。为了减少污染的危险，整个过程均需无菌操作，否则鸡胚一经污染，即迅速死亡或影响病毒的培养。

2. 适宜的培养温度。接种过的鸡胚，应根据实验病原繁殖需要的温度，放入 33-37°C 温箱内培养。

1. 防止污染。为了减少污染的危险，整个过程均需无菌操作，否则鸡胚一经污染，即迅速死亡或影响病毒的培养。

2. 适宜的培养温度。接种过的鸡胚，应根据实验病原繁殖需要的温度，放入 33-37°C 温箱内培养。