原理
人和小鼠的脂肪组织均可用于分离ASC，可以获得相当数目的ASCs。人脂肪组织通常来源于抽脂。小鼠脂肪组织则取自腹股沟处脂肪垫。
材料与仪器
小鼠 4〜6只
Hank’s缓冲盐溶液（HBSS) ASC培养基 胶原酶溶液 聚乙烯吡咯酮碘溶液 麻醉剂：三溴乙醇 37℃水浴
Petris培养皿 9 cm 离心管 50 ml 组织培养瓶 25 cm2 剪刀（2把） 镊子（2把）
Hank’s缓冲盐溶液（HBSS) ASC培养基 胶原酶溶液 聚乙烯吡咯酮碘溶液 麻醉剂：三溴乙醇 37℃水浴
Petris培养皿 9 cm 离心管 50 ml 组织培养瓶 25 cm2 剪刀（2把） 镊子（2把）
步骤
(a)37℃水浴中预热HBSS和ASC培养基。
(b)麻醉动物后处死。
(c)转移动物至层流净化罩中。
(d)70%酒精消毒腹部。
(e)采用低位横向切口打开腹腔。
(f)用镊子取出性腺/附睾和腹股沟处的脂肪垫。
(g)将脂肪置于培养皿中，加入HBSS。
(h)待所有动物脂肪取出后，将脂肪转移至新的培养皿中。
(i)加人含有5%聚乙烯吡咯烷碘酮的HBSS 2〜3 min。
(j)漂洗组织并用HBSS洗涤脂肪。
(k)用无菌镊子将脂肪转移至50 ml离心管中。
(l)用无菌剪刀将脂肪切碎。
(m)加入与组织体积相同的胶原酶溶液并混匀。
(n)将离心管置于37℃水浴中60 min,其间不时混匀一下。
(o)离心，50〜100 g，5 min。
(p)取出离心管，用力摇晃（将基质细胞与原代脂肪细胞完全分离），再次离心5 min。.
(q)小心吸去上层油脂，油脂层中含有原代脂肪细胞，注意不要破坏位于下方的基质-血管细胞层。
(r)加人5〜10 ml PBSA,重悬沉淀，再次离心5 min。
(s)洗涤三次，注意不要吸走基质-血管细胞层。
(t)最后一次洗涤后，加人8 ml ASC培养基重悬沉淀，转移至T25培养瓶中，置于37℃,5% CO2温箱中。
(u)待细胞贴壁生长2〜4天后换液。
(v)换液时通过弃去培养基，从而去除未贴壁的细胞。
(w)以后每周更换培养基2次。
来源：丁香实验
