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辅助方案 准备SDS-PAGE蛋白质样品

相关实验:氨基酸序列测定实验

最新修订时间:

原理

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材料与仪器

蛋白质样品
1 mol/L NaHCO3 (可选) 100% 冰冷乙醇(不含变性剂 USP 级) 样品缓冲液 0.1% (V/V)焦宁 Y 染料
超滤浓缩器/Speedvac蒸发器 拉细的巴斯德吸管/凝胶加样吸头 1.5 ml 微量离心管 离心机

步骤

1. 必要时,用1 mol/L NaHCO3将蛋白质样品的盐浓度调至 > 100 mmol/L。


2. 用超滤浓缩(按厂商说明)或真空浓缩(关键是当释放真空时,不要引入空气中的残屑)将样品体积浓缩至 50~100 μl, 移入 1.5 ml 微量离心管。


3. 样品加入 9 倍体积的冰冷 100% 乙醇。在干冰中放置 1 h,或 -20°C 过夜。许多样品在这步就可以永久保存了。


4. 在最大速度下微量离心 15 min, 用拉细的巴斯德吸管或凝胶加样吸头吸去上清,保留沉淀。


5. 加入 10 ml 样品缓冲液,并用吸液器上下抽吸以溶解样品。在沸水浴中煮沸 3 min。


6. 样品加入 1μl 0.1% 焦宁 Y (示踪染料),加样于微型凝胶。

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注意事项

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常见问题

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来源:丁香实验

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