纯化的基因组 DNA 的微球菌核酸酶消化实验

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0.5～1 mg 纯化的基因组 DNA 微球菌核酸酶（MNase）
核缓冲液 C 0.5 mol L CaCl2 0.25 mol L EGTA 氯仿
设置在 68℃ 的加热器 冰块

1. 取 100 ug 基因组 DNA 加入到室温的核缓冲液 C 中，使终体积为 300 ug。准备 4～5 管此溶液。

重要提示：对于每个溶液，直到反应进行到第 4 步后再进行下一管的反应。

2. 加入 CaCl₂ 至终浓度为 3 mmol/L。

3. 加入 MNase 至 0.5、1、2、3 U/ml。剧烈地混合使酶均匀的分布（溶液可能有些黏稠），反应 3 min。

4. 将溶液转移到含有 50 ul 0.25 mol/L EGTA 预热到 68℃ 的管子中，68℃ 温育 10 min。

5. 将管子转移到冰块上。

6. 在 1.2％ 的小型琼脂糖凝胶上上样 200 ng，电泳检测消化的程度。

7. 对于感兴趣的样品加入等体积的氯仿抽提一次。

8. DNA 的沉淀、定量和鉴定。

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