材料与仪器
骨骼或白细胞的基因组 DNA
10 X restriction 缓冲液 BamHI 和 EcoRV 限制性内切核酸酶 NaCl 溶液 乙醇 6 X 胶聚蔗糖 oading 缓冲液 琼脂糖胶 DNA 分子质量标记 1 X TBE 缓冲液 乙碘氯苯丁酯溶液 杂交液 2 X SSC(现配） 精液 DNA
dCTP mtDNA 探针 离心机 胶电泳仪 恒温箱 Eagle Eye I I 视频影像显像系统 荧光尺 Zeta探针印迹薄膜 DNA 正压转移装置 紫外线 Stratalinker 印迹纸 杂交瓶 磷光剂
10 X restriction 缓冲液 BamHI 和 EcoRV 限制性内切核酸酶 NaCl 溶液 乙醇 6 X 胶聚蔗糖 oading 缓冲液 琼脂糖胶 DNA 分子质量标记 1 X TBE 缓冲液 乙碘氯苯丁酯溶液 杂交液 2 X SSC(现配） 精液 DNA
dCTP mtDNA 探针 离心机 胶电泳仪 恒温箱 Eagle Eye I I 视频影像显像系统 荧光尺 Zeta探针印迹薄膜 DNA 正压转移装置 紫外线 Stratalinker 印迹纸 杂交瓶 磷光剂
步骤
基本方案 线粒体 DNA 的筛查用 Southern blot 研究基因重排
![啡啶溴化物染色使DNA从胶凝体到膜转移并以紫外光透射照明检测荧光是成功的。 13. 使用紫外线照射（ StrataUnker)交联D N A 至膜上。 14. 加热杂交烤箱使预杂交液至65° C 。在 2X S S C 中使膜侵湿，适用于供应滤网的杂交 烤箱膜以保证缓冲液通入，并且插入薄膜至一个玻璃杂交瓶中，这个做法的全部细 节参见制造商的说明书。 15. 在 98°C用高频声波使鲑精D N A 变 性 IOmin并加预热的预杂交液（ 一般每张薄膜 20m l足够了）使最终浓度为lO^g/ml，加预杂交液至玻璃瓶中包括薄膜并于65°C 旋 转 2〜4h 。 16. 使 [cr32P] dCTP-标记的m t D N A 探 针 变 性 （5X 105〜5X 106cpm/m l杂交缓冲液） ， 在 95°C加 热 5min并用高频声波分裂鲑精DNA (终浓度lC^ g/ml)。 17. 加 热 Ilml (H ybaid小型杂交瓶）或 25ml (H ybaid大的杂交瓶）中 杂 交 （ 溶）液 至 65°C ，然后加入变性的高频声波分裂的鲑精D N A 和 m t D N A 探针。在玻璃瓶中 用 杂 交 （ 溶）液更换预杂交液并在65°C旋 转 18〜20h。 18. 用 2X S S C /0. 1 % S D S 洗涤膜三次，每次30〜60min。用 1X S S C / 0 . 1 % S D S 洗30〜 60min，然后再用〇.5X S S C /0. 1 % S D S 洗 30〜60min。所有洗涤过程均在65°C 。 19. 无菌去离子水冲洗膜并用塑料袋封闭。柯达照相机高速X (射）线胶片进行放射自 显 影 （ 一20°C 、 1〜3d) 或磷光计分析（ 少数几小时根据制造商的推荐） 。](http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2016/08/A1470106275881p3ycbcevejpng_small.jpg)
支持方案 使用大范围 PCR 线粒体 DNA 探针的准备
来源：丁香实验
