材料与仪器
步骤
基本方案 小鼠巨噬细胞的活化
材料
小鼠巨噬细胞，静 息 状 态（单 元 6.1)
D M E M - 10 : 含 1 0 % (V /V ) FBS (HyCloxie) 和 50 ug/1111 硫酸庆大霉素的 D M E M
培 养 基（G I B C O /B R L )![含 500U/ml 小鼠重组 7-干 扰 素 （IFN-y ， Pharmingen) 的 D M E M -10 E .c o G L P S (Sigma)，浓度 5iug/m l ， D M E M -10 配制 12m m X 75m m 聚丙烯塑料试管，带 盖 （Falcon) Sorvall R T 6000 4°C离心机及H 1000B 转 子 （或替代品） 1 . 用 D M E M -I O 调整小鼠腹腔巨噬细胞浓度至I X l O 6个细胞/m l 。如下所示，准 备 6 只 12m m X 75m m 试管，每管分别加入0.5m l 细胞悬液。 未刺激组 致敏组 IFN-y激活的致敏组 L P S 激活的致敏组 IFN-7激活组 L P S 激活组 2 . 加 入 ImI浓 度 为 500U / m l 的 IFN-7 (终 浓 度 2U /ml) ，置 37°C ， 5 % C 0 2细胞培养箱 中培养4h ，用以致敏巨噬细胞。 实验室可摸索各自的技术方法，用以致敏巨噬细胞。例 如 ，用不同浓度的IFN- 7 (0.1〜l〇U /ml) 刺激巨噬细胞来测定剂量反应曲线。 3 . 加 入 1： 111〇]\^]\4-10,4°(：， 40(^离心1〇 111丨11，弃上清。重 复 洗 涤 细 胞 2次 后 ，加入 0. 5ml D M E M -I O 培养基重悬细胞。 4 . 在相应试管中加入5 4 浓 度 为 500U / m l 的 IFN-7 (终 浓 度 lO U /ml) 或 ImI 浓度为 5/xg/ml的 LPS (终 浓 度 10ng/ml)。置 37°C ， 5 % C 0 2细胞培养箱中培养lh，用以激 活巨噬细胞。 用不同浓度的IFN-7 (1〜50U /ml) 或 LPS (100pg/m l 〜100ng/ml) 测定巨嗤 细胞对IFN-y 的剂量反应曲线。胞内、外的多种因子都能作为已致敏巨噬细胞的激 活信号，这些分子均可替代IFN-7。 5 . 加入111110矹£“ -10,4°(：， 40(^离心1〇 111丨11，弃上清。重 复 洗 涤 细 胞 2次 后 ，将细 胞重悬于〇• 5ml D M E M -I O 中备用](http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2016/07/A1469600968779qp2xpmbgbepng_small.jpg)
辅助方案炎性小鼠巨噬细胞的活化
附加材料
炎性巨噬细胞：促炎剂刺激后的小鼠腹腔巨嗟细胞（单 元 6.1)
2 4 孔 平 底 细胞培养板（Costar)
1 . 设置实验组和对照组（见基本方案步骤 1)，在 2 4 孔板中每孔加入 0.5m l 细胞悬液。
2 . 置 37°C ， 5 % C 〇 2 细胞培养箱中培养 I h 使巨噬细胞贴壁。
3 . 弃上清后，沿孔壁缓慢加入 Iml D E M E M - I O 培养基，避免破坏贴壁细胞层。重复洗涤 2 次 ，最后加入 0.5 ml D E M E M - I O 培养基。
4 . 致敏及激活巨噬细胞，参见基本方案步骤 2 和 4 。
来源：丁香实验
