弗氏佐剂的使用方法实验

Ribi 佐 剂 系 统（RAS) 的应用

1.材料

Ribi 佐剂

抗原 (溶于盐水）

防护眼镜

满旋振荡器

乳胶手套

注射器

2.步骤

(1) 使 用 RAS，建议抗原浓度为 50〜500 ug/ml，溶于盐溶液（PBS)。某些抗原需要使用洗涤剂以增加其溶解度。在这种情况下，尽量将洗涤剂的终浓度控制在0.2 % 以下。

(2) R A S 是以分装管出售的一种浓缩液，各免疫刺激剂的每管含量均为 500 ug 。每管能与含抗原的盐溶液重新组成终体积为 2ml 的混合液。使 用 前 37〜45℃ 水浴或温箱孵育约10min，这将促进下一步油与抗原溶液的混合。

(3) 直接注射 2ml 抗原溶液到瓶中，剧 烈 振 荡 2〜3 min(单 磷 酸 类 酯 A 、海藻糖二霉菌酸酯，以及分枝杆菌细胞壁成分等各抗原刺激剂在抗原-佐剂乳化剂中的终浓度将为250ug/ml。

或者，如果一瓶佐剂暂时不需全部使用，可 用 1ml PBS 或盐水（不含抗原）稀释一瓶RAS，剧烈振荡。用一无菌注射器和 22 号针头，吸取所需体积的佐剂，与等量的含抗原的盐水混合，剧烈振荡混匀。剩 下 的 未 使 用 的 部 分 可 4℃ 保存 ，数月内稳定（使 用 前 37℃预热）。

注 意 ：用 RAS制成的抗原-佐剂乳化剂不像弗氏佐剂或 TiterMax 制成的乳剂那么黏稠 ，它滴到水面上会轻易地散开。

(1) 抽吸乳化剂到 1 ml 注射器，排出气泡，以备注射。

(2) 注射抗原-佐剂乳化剂免疫动物的剂量分别如下。

a. 小鼠：总剂量 0.2 ml，分两点皮下注射 (0.1ml/点），或总量 0.2ml 腹腔内注射。

b.大鼠或豚鼠：总剂量 0.5 ml，分两点皮下注射 (0.2 ml/点），0.1ml 腹腔内注射。

c. 兔 ：总剂量 1ml，0.3 ml/点 ，分别在两只大腿肌注射，0.1ml 颈后皮下注射 ，余下0.3ml 于其他部位弥散注射。

d. 羊 ：总剂量 lml，0.5 ml/点 ，分别在两只后腿肌注射

(3) 建议：每月给予加强免疫注射疫苗，直至获得所期望的抗体滴度。