弗氏佐剂的使用方法实验

超声乳化弗氏完全佐剂（或弗氏不完全佐剂）

水溶性抗原可经超声处理与弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂乳化。

1.材料

弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂

无菌聚丙烯管

防护眼镜

注射器

抗原（溶 于 PBS)

超声探头

乳胶手套

冰浴

盛有预冷自来水的烧杯

2.步骤

(1) 计算每次注射所需抗原量及体积。皮下注射或肌肉注射时，每 只 小 鼠 每 次 5〜100ug ，少 于 200uL。腹腔内注射时，每只小鼠每次 200 〜500uL。洗涤剂会减弱乳化作用，应避免。准备大约比所需量多 50 % 的疫苗。

(2) 使 用 前 37℃预热弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂，强烈振荡 1〜2 min，或用手倒转瓶子数次将结核分枝杆菌均匀重悬。将弗氏完全佐剂与等体积的水溶性抗原转入一无菌聚丙烯管中。

(3) 超声处理可产生大量热，会导致蛋白质抗原变性。为避免混合物过热，在超声中或间隙将聚丙烯管置于冰上。每 次 间 歇 5〜20s ，上下调节管的高度，确保整个混合物均匀乳化。注意操作时佩戴耳塞。

(4) 倒转聚丙烯管以确定乳化剂的稠度。持续乳化，间隙 10s，直到稳定的乳化剂形成 。当乳化剂在倒转的管中不动或在水面上形成稳定的油珠时，乳化即可完成。

(5) 将乳化剂吸人 1ml 注射器，或 者 用 Spack 和 Toaves 的 [18] 转移技术将乳化剂转人 1ml 注射器内，具体步骤如下：从一个注射器上取出无菌推芯，芯头的大小与乳化剂所在的管内直径一致。乙醇擦拭管底以灭菌，然 后 用 灭 菌 的 18 号针头在管底穿孔，握住一个已拔出推芯的 1ml 无菌注射器顶部直接对准乳化剂管底的洞，用上述大小合适的无菌推芯将管内乳化剂从管底推人 1ml 注射器。