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根癌农杆菌接种外植体的准备(见注 6)

相关实验:农杆菌介导的小麦新鲜离体幼胚的转化实验

最新修订时间:

材料与仪器

面包小麦 硬粒小麦
乙醇
层流罩超净台

步骤

1. 面包小麦和硬粒小麦开花后 12~16 天剪下幼穗,将种子幼体用 70% ( V/V)的乙醇浸泡 1 min,再换用 10% 乙醇(V/V)轻轻晃动 10 min 进行表面消毒,最后用足量的灭菌蒸馏水冲洗三次以上(见注 7) 。

2. 在层流罩超净台上,借助体视显微镜从种子幼体中分离出幼胚(见注 8) 。用锋利的手术刀除去胚轴。

3. 将幼胚盾片朝上接入直径 55 mm 或 60 mm、盛有侵染培养基的培养皿,以确保盾片与农杆菌细胞充分接触,与 3.3 节的步骤 2 衔接。为防止添加农杆菌菌液时幼胚漂浮,要确保幼胚同培养基接触良好,每皿最佳约接 50 个幼胚。

来源:丁香实验

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