材料与仪器
高尔基体
Chamber 缓冲液
Chamber 缓冲液
步骤
1. 从 1.2 mol/L 蔗糖/匀浆液界面处分离富含高尔基体的部分至终体积为 5 ml 左右 。
2. 分别加入 3 mg 的粗制曲霉 X-A型 α-淀粉酶和来自大麦芽的 3-A型 α-淀粉酶。
3. 将混合物在 4℃ 保温 45 分钟。
4. 保温结束后用尖端内径约 1 mm 的巴斯德吸管将悬液反复吹吸 40 次完成解除堆积的过程 。
5. 准备电泳介质（Chamber 缓冲液）
Chamber 缓冲液：
10 mmol/L 二乙醇胺
10 mmol/L 冰酸酸
5 mmol/L 葡萄糖
0.25 mmol/L 蔗糖
0.5 mmoI/L MgCl2
6. 电泳中采用如下条件（除非厂家另有推荐）：167 mA ( 恒流），131±10% V/cm，缓冲液流速为 2.75 ml 每分部每小时，样品注入速度为 3.5 ml/小时，温度为 6℃，采用连续自由流动电泳装置（如 VAP 21，Weber GmbH, Munich, Germany )。
7. 离心收集得到的分部，例如在微量离心机中离心 2 分钟，然后重悬并用于分析。
2. 分别加入 3 mg 的粗制曲霉 X-A型 α-淀粉酶和来自大麦芽的 3-A型 α-淀粉酶。
3. 将混合物在 4℃ 保温 45 分钟。
4. 保温结束后用尖端内径约 1 mm 的巴斯德吸管将悬液反复吹吸 40 次完成解除堆积的过程 。
5. 准备电泳介质（Chamber 缓冲液）
Chamber 缓冲液：
10 mmol/L 二乙醇胺
10 mmol/L 冰酸酸
5 mmol/L 葡萄糖
0.25 mmol/L 蔗糖
0.5 mmoI/L MgCl2
6. 电泳中采用如下条件（除非厂家另有推荐）：167 mA ( 恒流），131±10% V/cm，缓冲液流速为 2.75 ml 每分部每小时，样品注入速度为 3.5 ml/小时，温度为 6℃，采用连续自由流动电泳装置（如 VAP 21，Weber GmbH, Munich, Germany )。
7. 离心收集得到的分部，例如在微量离心机中离心 2 分钟，然后重悬并用于分析。
来源：丁香实验
