单层细胞在细胞瓶中的接种

单层生长的细胞增殖，融合成片，并长满细胞瓶表面。有些细胞靠频繁地换液可维持细胞在平台期数天至数周；而许多其他细胞系需要胰蛋白酶处理、传代培养后才能存活下来，用胰蛋酶处理可将细胞从生长物表面分离下来以促进传代培养。后种细胞系不易呈现出接触抑制并继续增殖，达到极限后细胞则从细胞瓶表面脱落, 很难再弥散接种。

1) 下列步骤描述胰蛋白酶处理细胞的过程（见下文“胰蛋白酶处理分离细胞”）

2) 重悬细胞于培养液中。

在此时进行细胞计数嚴好。若记录传代次数以识别细胞的生长经历，可按方便传代计划的比例稀释细胞

3) 分装细胞悬液于含有合适 PH 的培养液的细胞培养瓶或培养皿中。

传代细胞在贴壁和再次进行代谢前的大约几小时中不能自行调节 PH。传代期是特別重要的时期.

培养液的 pH 和细胞培养瓶或培养皿气相中的 CO₂ 含量应在接种细胞前平衡好。在细胞加人前将培养液加入培养瓶中，并将盖子松松地盖上，置培养箱中放罝 10~15 分钟即可。

4) 在接受细胞的细胞培养瓶或培养皿中混勻细胞，将细胞悬液均匀铺在容器表面、细胞貼壁通常笫 8~10 小时，人二倍体成纤维细胞经常按以 1:4 比例，一周传代一次。细胞倍增时间的估算可采用以下方法：即满版细胞 1:2 比例传代后再次铺满培养瓶的时间，或以 1:4 比例传代两次细胞倍增时间后细胞再次铺满。