练习4：单层细胞的换液

目的

给单层细胞换新鲜培养纂。

应用

用于给快速生长的培养物在传代之间更换培养基，或从一种类型培养基换成另一种培养幕，

训练目标

加强无菌操作技巧．介绍细胞维持的一个基本原理，即在持续培养周期中更换培养基。让实习生观察培养基并明白耗竭培养基的特征．例如细胞密度和（或）pH降低，并观察有没有污染．r解交叉污染的风险。比较冷藏的培养基是否需预温。

监督：向实习生说明耗竭培养革的特征．并示范操作吸取和更换培养幕。

时间：30 min.

背景信息

更换培养篆（见13.6.2节）；监控污染物（见19.4节）；交叉污染（见19.5节）.

示范材料和操作：练习需要至少三瓶半数汇合的连续培养细胞系，如Hela或Vero细胞，并且要标明接种时间和数址。给实习生示范如何从冰箱取培养基，井要强调每个细胞系需特定培养基，而不能混声U或操作。还要示范如何擦拭和整理超净台，牌箱的使用，将培养物放回解箱，用肉眼并在显微镜下观察细胞的状态（有无污染，是否需换液．艘康状态）。示范如何抽取培养基和更换新培养基，这需要真空泵或废液烧杯，如果有必要可以充5%c()：。

安全提示：如果操作人谏细胞．需要使用U级生物安全柜，丢弃的培养基中要加人消毒剂（见7.8.5节和表7.7）。

练习

概要

吸取并丢弃旧培养基，更换新鲜培养基。

标准方案

给单层细胞换液（见方案13.1）。

补充方案：完全培养基的制备（见方案11.7,11.8或11.9，以及练习3);pH标准色阶的制备（见方案9.1)；培养皿或板的操作（见方案6.3）。

实验变化

在练习中更换了冷藏的和预温的培养基后．接下来需要做细胞计数（见练习12)另一瓶培养物则不换液，而是同时川胰蛋白醉消化。

背景：完全培养基（见方案9.5)；换液（见13.6.2节）。

数据

比较已经更换了冷藏或预温的培养基（在练习12中计数）与未换液的培养物之间外观和生长的差异。

日常维护需在记录表中进行记录（表12.5)，并且把实验数据填人练习12的表格。