凝血酶原时间（PT）测定实验

待测血浆加入过量的含钙组织凝血活酶，重新钙化的血浆在组织因子存在时激活因子成为X成为Xa。后者使凝血酶原转变为凝血酶，凝血酶使纤维蛋白原转变为凝血不溶性纤维蛋白，测定凝固所需时间、即为待测血浆凝血酶时间（PT）、PT测定是外源性系统理想和常用的筛选实验，也可作为外源性途径凝血固定做定量试验，同时也可用于口服抗凝剂治疗的监控．标本的来源与保存：

静脉采血，置于含有1/10体积0.109mol/L枸橼酸钠抗凝液（1份抗凝液＋9份全血）的塑料管或硅化玻璃管中，轻轻颠倒混匀．3000rpm（或2500）离心15分钟，收集上层液（血浆，黄色），标本在不同条件下保存时间如下：－80℃保存，不宜超过30天，一20℃保存，不宜超过14天，2一8℃保存，不宜超过6小时，22-24℃保存，不宜超过2小时测定．

血浆
PT试剂
蒸馏水 烧杯 一次性注射剂

1. 试剂重建：

于保存每瓶PT试剂加人2.0ml蒸馏水轻摇溶解．注意：试剂溶解后2－8℃可保存7天，室温（15-25℃）可保存24小时，勿冻结．

2. 手工测定：

取待测血浆（参比血浆）0.1ml．37℃孵育2分钟，加入37℃预温凝血活酶0.2ml；混匀，立即启动秒表，记录凝固时间，即为PT值．

3. 血凝仪测定：

请按仪器提供的参数操作

正常值：

1. 以时间表示11-15秒

2. 以PTD表示0.95-1.24

3. 以INR表示0.94-1.30

l. 采血必须使用一次性塑料注射器或硅化玻璃注射器，贮血必须使用塑料试管或硅化玻璃管不宜使用普通玻璃管，避免凝血因子活化．

2. 采血时止血带不可束缚过紧并不应超过5分钟，否则导致凝血及纤溶因子活化．

3. 血液应立即加抗凝剂，血浆制备必须及时，血浆分离应尽快去除血小板血浆分离后应尽快测定。

4. 血浆预温不宜超过10分钟．

5. 凝血活酶预温不宜超过30分钟。

6. 用浊度法测定终点的自动化凝血仪，溶血和较明显的黄疸及脂血会影响测定结果，此时宜用手工法或电子机械或凝血仪测定．

7. 红细胞比容超过55％或小于20％时，应调整抗凝剂用量，抗凝剂体积（ml）＝0.00185×血液体积（ml）×（100－比容）.

8. 不宜使EDTA-Na₂. 肝素，草酸盐抗凝，应使用0.109mol/L拘橼酸钠抗凝。

9. 一80℃及一20℃保存样品，测定时37℃迅速融化，不可反复冻融．

10. 样品采集避免溶血及组织液污染。

11. 建议各实验室建立自己的参考值范围。

12. 手工操作时，凝血酶原时间的终点计算以出现混浊的初期凝固为准．

13. 测定温度36.5-38.5℃过低或过高温度均使PT延长．

因仪器/试剂不同，会得出不同结果，故很难统一规定参考值。各实验室应根据自己的仪器、试剂等条件，自行测定一批健康人，建立参考值。此后至少每年或当条件有变化时，根据新的条件，重新建立。参考值PT测定的一切条件均应与患者血浆PT测定相同（包括采血、容器、抗凝剂等）。健康供血者应选至少20个18～55岁的男性和非妊娠、月经期女性，不可服药，在平静休息状态采血、以减少个体差异（有条件时，可测一批老年人和小儿，分开统计）。同时应分开几天采血和测定，以减少天间差异。测定结果经统计学处理，计算标准差：以两个标准差（2SD）或95%可信限作为参考范围。对于三个标准差是正常还是异常，需结合具体情况进行评估。从统计学上讲，其中有些人是正常的。用以上标准，病人（PT异常）则很少会遗漏。