原理
(一)亚硝酸盐测定：样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与N－1－萘基乙二胺偶合形成紫红色染料，与标准比较定量。
材料与仪器
步骤
一、实验仪器、试剂
（一）仪器：小型粉碎机；分光光度计；分析天平
（二）试剂： 实验用水为蒸馏水，试剂不加说明者，均为分析纯试剂。
1 氯化铵缓冲液：1L 容量瓶中加入500mL 水，准确加入20.0mL 盐酸，振荡混匀，准确加入50mL 氢氧化铵，用水稀释至刻度。必要时用稀盐酸和稀氢氧化铵调试至pH9.6～9.7。
2 硫酸锌溶液(0.42mol/L)：称取120g 硫酸锌(ZnSO4·7H2O)，用水溶解，并稀释至1000mL。
3 氢氧化钠溶液(20g/L)：称取20g 氢氧化钠用水溶解，稀释至1L。
4 对氨基苯磺酸溶液：称取10g 对氨基苯磺酸，溶于700mL 水和300mL 冰乙酸中，置棕色瓶中混匀，室温保存。
5 N－1－萘基乙二胺溶液(1g/L)：称取0.1gN－1－萘基乙二胺，加60%乙酸溶解并稀释至100mL，混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，一周内稳定。
6 显色剂：临用前将N－1－萘基乙二胺溶液(1g/L)和对氨基苯磺酸溶液等体积混合。
7 亚硝酸钠标准溶液：准确称取250.0mg 于硅胶干燥器中干燥24h 的亚硝酸钠，加水溶解移入500mL 容量瓶中，加100mL 氯化铵缓冲液，加水稀释至刻度，混匀，在4℃避光保存。此溶液每毫升相当于500μg 的亚硝酸钠。
8 亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液1.00mL，置于100mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5.0μg 亚硝酸钠。
二、实验方法与步骤
1 样品处理
称取约10.00g(粮食取5g)经绞碎混匀样品，置于打碎机中，加70mL 水和12mL 氢氧化钠溶液(20g/L)，混匀，用氢氧化钠溶液(20g/L)调样品pH＝8，定量转移至200mL 容量瓶中加10mL 硫酸锌溶液，混匀，如不产生白色沉淀，再补加2～5mL 氢氧化钠，混匀。置60℃水浴中加热10min，取出后冷至室温，加水至刻度，混匀。放置0.5h，用滤纸过滤，弃去初滤液20mL，收集滤液备用。
2 测定
2.1 亚硝酸盐标准曲线的制备：吸取0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL 亚硝酸钠标准使用液(相当于0，2.5，5，10，15，20，25μg 亚硝酸钠)，分别置于25mL 带塞比色管中。
于标准管中分别加入4.5mL 氯化铵缓冲液，加2.5mL60%乙酸后立即加入5.0mL 显色剂，加水至刻度，混匀，在暗处静置25min，用1cm 比色杯(灵敏度低时可换2cm 比色杯)，以零管调节零点，于波长550nm 处测吸光度，绘制标准曲线。
低含量样品以制备低含量标准曲线计算，标准系列为：吸取0，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0mL亚硝酸钠标准使用液(相当于0，2，4，6，8，10μg 亚硝酸钠)。
2.2 样品测定：吸取10.0mL 上述滤液(1.1)于25mL 带塞比色管中，自2.1“于标准管中分别加入4.5mL 氯化铵缓冲液”起依法操作。同时做试剂空白。
三、计算
（一）仪器：小型粉碎机；分光光度计；分析天平
（二）试剂： 实验用水为蒸馏水，试剂不加说明者，均为分析纯试剂。
1 氯化铵缓冲液：1L 容量瓶中加入500mL 水，准确加入20.0mL 盐酸，振荡混匀，准确加入50mL 氢氧化铵，用水稀释至刻度。必要时用稀盐酸和稀氢氧化铵调试至pH9.6～9.7。
2 硫酸锌溶液(0.42mol/L)：称取120g 硫酸锌(ZnSO4·7H2O)，用水溶解，并稀释至1000mL。
3 氢氧化钠溶液(20g/L)：称取20g 氢氧化钠用水溶解，稀释至1L。
4 对氨基苯磺酸溶液：称取10g 对氨基苯磺酸，溶于700mL 水和300mL 冰乙酸中，置棕色瓶中混匀，室温保存。
5 N－1－萘基乙二胺溶液(1g/L)：称取0.1gN－1－萘基乙二胺，加60%乙酸溶解并稀释至100mL，混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，一周内稳定。
6 显色剂：临用前将N－1－萘基乙二胺溶液(1g/L)和对氨基苯磺酸溶液等体积混合。
7 亚硝酸钠标准溶液：准确称取250.0mg 于硅胶干燥器中干燥24h 的亚硝酸钠，加水溶解移入500mL 容量瓶中，加100mL 氯化铵缓冲液，加水稀释至刻度，混匀，在4℃避光保存。此溶液每毫升相当于500μg 的亚硝酸钠。
8 亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液1.00mL，置于100mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5.0μg 亚硝酸钠。
二、实验方法与步骤
1 样品处理
称取约10.00g(粮食取5g)经绞碎混匀样品，置于打碎机中，加70mL 水和12mL 氢氧化钠溶液(20g/L)，混匀，用氢氧化钠溶液(20g/L)调样品pH＝8，定量转移至200mL 容量瓶中加10mL 硫酸锌溶液，混匀，如不产生白色沉淀，再补加2～5mL 氢氧化钠，混匀。置60℃水浴中加热10min，取出后冷至室温，加水至刻度，混匀。放置0.5h，用滤纸过滤，弃去初滤液20mL，收集滤液备用。
2 测定
2.1 亚硝酸盐标准曲线的制备：吸取0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL 亚硝酸钠标准使用液(相当于0，2.5，5，10，15，20，25μg 亚硝酸钠)，分别置于25mL 带塞比色管中。
于标准管中分别加入4.5mL 氯化铵缓冲液，加2.5mL60%乙酸后立即加入5.0mL 显色剂，加水至刻度，混匀，在暗处静置25min，用1cm 比色杯(灵敏度低时可换2cm 比色杯)，以零管调节零点，于波长550nm 处测吸光度，绘制标准曲线。
低含量样品以制备低含量标准曲线计算，标准系列为：吸取0，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0mL亚硝酸钠标准使用液(相当于0，2，4，6，8，10μg 亚硝酸钠)。
2.2 样品测定：吸取10.0mL 上述滤液(1.1)于25mL 带塞比色管中，自2.1“于标准管中分别加入4.5mL 氯化铵缓冲液”起依法操作。同时做试剂空白。
三、计算
来源：丁香实验
