毒扁豆碱对乙酰胆碱作用的影响实验
最新修订时间：
材料与仪器
Acetylcholine chloride Physostigmine salicylic
Magnus 实验装置 XWTD204 台式自动平衡记录仪 载波放大器 力位移换能器 气泵 手术器械 水浴管 支台
Magnus 实验装置 XWTD204 台式自动平衡记录仪 载波放大器 力位移换能器 气泵 手术器械 水浴管 支台
步骤
1. 连接好实验装置，保证实验条件。
2. 记录装置的条件：将台式平衡记录仪量程旋纽置于 5mv,打开记录笔将笔调到记录的合适位置。取２g 砝码悬挂在换能器的小钩上，调节载波放大器的“增益”、“调零”旋钮，使记录笔上升１大格（25mm），取下砝码后，记录笔又到原位置（加砝码时调“增益”
旋钮，取下砝码时调“调零”旋钮，需要重复数次即可）。记录速度 8mm/min。
3. 标本的制备：将蟾蜍破坏大脑与脊髓，背位固定于蛙板上，剪开腹部皮肤，在耻骨上端以小镊子分别穿线结扎左右腹直肌的肌腱，于结扎的下方剪断肌建，沿腹白线向上剪开（应注意避免剪断腹壁内侧的腹壁静脉）以分离左右腹直肌，再沿腹直肌外缘向上剪开，在第二腱划高度分用线结扎两侧腹直肌，并在结扎线上方剪断肌肉。标本制成后，以 Ringer 氏液洗净，放入置有 Ringer 氏液的烧杯内，备用。
本实验选用蟾蜍腹直肌的理由是因为蟾蜍腹直肌对乙酰胆碱较敏感，药物作用较缓和、稳定，易于比较收缩的高度。
4. 标本的悬挂：将腹直肌标本一端固定在浴管底部，另一端悬挂于力位移换能制的小钩上。腹直肌的张力变化通过力位移换能器、载波放大器后，记录在台式平衡记录仪上。悬挂好标本后, 立即换液１次，再给腹直肌标本加前负荷 2g（上升１大格、25mm 即可），稳定 30 分钟，即可加药。
5. 给药方法：按累积给药法，先观察各浓度乙酰胆碱收缩蟾蜍腹直肌的量效关系，给药顺序见表 4-8。然后冲洗，先冲洗４－５次，再每隔 10 分钟换液１次，待腹直肌标本重新恢复至基线（约 40 分钟）后,加入 10-3mol/L Physostigmine（毒扁豆碱）0.1ml,作用 15 分钟后，仍按累积给药法加入各度的乙酰胆碱，观察毒扁豆碱对乙酰胆碱量效关系的影响，给药顺序见表 4-9。
6. 绘制量效曲线：以乙酰胆碱引起收缩的最大高度为 100％，计算各浓度乙酰胆碱收缩腹直肌的百分数。计算方法如下：
绘制量效曲线时，以收缩百分数为纵座标，以乙酰胆碱浓度的负对数为横座标，绘制量效曲线（曲线Ａ：乙酰胆碱收缩蟾蜍腹直肌的量效曲线；曲线Ｂ：毒扁豆碱预处理后乙酰胆碱收缩蟾蜍腹直肌的量效曲线）。
2. 记录装置的条件：将台式平衡记录仪量程旋纽置于 5mv,打开记录笔将笔调到记录的合适位置。取２g 砝码悬挂在换能器的小钩上，调节载波放大器的“增益”、“调零”旋钮，使记录笔上升１大格（25mm），取下砝码后，记录笔又到原位置（加砝码时调“增益”
旋钮，取下砝码时调“调零”旋钮，需要重复数次即可）。记录速度 8mm/min。
3. 标本的制备：将蟾蜍破坏大脑与脊髓，背位固定于蛙板上，剪开腹部皮肤，在耻骨上端以小镊子分别穿线结扎左右腹直肌的肌腱，于结扎的下方剪断肌建，沿腹白线向上剪开（应注意避免剪断腹壁内侧的腹壁静脉）以分离左右腹直肌，再沿腹直肌外缘向上剪开，在第二腱划高度分用线结扎两侧腹直肌，并在结扎线上方剪断肌肉。标本制成后，以 Ringer 氏液洗净，放入置有 Ringer 氏液的烧杯内，备用。
本实验选用蟾蜍腹直肌的理由是因为蟾蜍腹直肌对乙酰胆碱较敏感，药物作用较缓和、稳定，易于比较收缩的高度。
4. 标本的悬挂：将腹直肌标本一端固定在浴管底部，另一端悬挂于力位移换能制的小钩上。腹直肌的张力变化通过力位移换能器、载波放大器后，记录在台式平衡记录仪上。悬挂好标本后, 立即换液１次，再给腹直肌标本加前负荷 2g（上升１大格、25mm 即可），稳定 30 分钟，即可加药。
5. 给药方法：按累积给药法，先观察各浓度乙酰胆碱收缩蟾蜍腹直肌的量效关系，给药顺序见表 4-8。然后冲洗，先冲洗４－５次，再每隔 10 分钟换液１次，待腹直肌标本重新恢复至基线（约 40 分钟）后,加入 10-3mol/L Physostigmine（毒扁豆碱）0.1ml,作用 15 分钟后，仍按累积给药法加入各度的乙酰胆碱，观察毒扁豆碱对乙酰胆碱量效关系的影响，给药顺序见表 4-9。
6. 绘制量效曲线：以乙酰胆碱引起收缩的最大高度为 100％，计算各浓度乙酰胆碱收缩腹直肌的百分数。计算方法如下：
绘制量效曲线时，以收缩百分数为纵座标，以乙酰胆碱浓度的负对数为横座标，绘制量效曲线（曲线Ａ：乙酰胆碱收缩蟾蜍腹直肌的量效曲线；曲线Ｂ：毒扁豆碱预处理后乙酰胆碱收缩蟾蜍腹直肌的量效曲线）。
来源：丁香实验
