原理
1. 取肝素或 EDTA 抗凝全血(100 μl/份),置 12×75 mm 专用塑料试管中。
2. 加入 50 μl 特异的单克隆抗体(一抗),室温下孵育 30 min。
3. 置 Q-PREP 仪上溶解红细胞,稳定和固定白细胞。
4. 离心(800~1000 rpm,5 min)弃上清液,用 PBS 洗涤细胞 2 次。
5. 加入 50 μl 荧光(FITC 或 PE)标记的第二抗体,室温下避光染色 30 min。
6. 上流式细胞仪检测。
材料与仪器
全血样品,PBS,抗体,Q-PREP 仪,流式细胞仪
步骤
1. 取肝素或 EDTA 抗凝全血(100 μl/份),置 12×75 mm 专用塑料试管中。
2. 加入 50 μl 特异的单克隆抗体(一抗),室温下孵育 30 min。
3. 置 Q-PREP 仪上溶解红细胞,稳定和固定白细胞。
4. 离心(800~1000 rpm,5 min)弃上清液,用 PBS 洗涤细胞 2 次。
5. 加入 50 μl 荧光(FITC 或 PE)标记的第二抗体,室温下避光染色 30 min。
6. 上流式细胞仪检测。
注意事项
1. 新鲜全血一般室温下放置 8 小时以内可以使用,时间过长会使活性降低,影响测定结果。
2. 抗凝血应保证无血块凝集。
3. 全血加入试管中时,应尽量避免加到试管壁上,如沾到了管壁上必须用用棉签擦净,否则会影响细胞二维点图的细胞群的分离效果。
来源:丁香实验