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气相色谱-质谱法

相关实验:测定肝、肾和肉中 b-受体激动剂残留量实验

最新修订时间:

材料与仪器

肝 肾 肉
乙酸钠缓冲溶液 美托洛尔 高氯酸 浓氢氧化铵溶液
离心瓶 恒温箱 三角漏斗 水平振荡器 固相色谱柱

步骤

1.  提取
 
称取(10 ± 0.1)g经捣碎样品于一个100 mL离心瓶中,加入15 mL 的乙酸钠缓冲溶液(0.2 mol/L,pH 5.2),混合2 min。添加120 ng作为内标物的美托洛尔于全部肝、肾和肉的待测样品中。加50 uL的β-盐酸葡萄糖酸苷酶-芳基硫酸酯酶,加盖后超声振荡15 min。于恒温箱中37 ℃培养16 h。加入10 mL 0.1 mol/L的高氯酸,混合均匀并用11.7 mol/L的高氯酸(浓)调节pH值至1 ± 0.3。以4400 r/mL离心10 min后,将上清液经过塞有少许脱酯棉花的三角漏斗过滤 至另一100 mL离心管中。用浓氢氧化铵溶液(浓度约17%)调节pH值至9.5 ± 0.3。用氯化钠饱和水相。分别用20 mL和15 mL的异丙醇-乙酸乙酯(6 + 4)混合溶液提取,每次混合2 min,于水平振荡器上振荡15 min,3000 r/min离心10 min。转移有机相至50 mL的旋转蒸发烧瓶中,于(45 ± 5)℃蒸发有机相至干。加入12 mL的磷酸盐缓冲溶液使蒸发残渣成为悬浮液后,以2000 r/min离心5 min。
 
2.  净化

将C18小柱(500 mg,3 mL)和SCX小柱(500 mg,3 mL)按从上到下的次序装好。依次用5 mL水、5 mL甲醇和5 mL 0.03 mol/mL盐酸溶液以一定的流速过柱活化。转移溶液至固相色谱柱的顶部小心缓慢地抽吸固相色谱柱,此步操作至少需要10 min。用2 mL 1 mol/L的乙酸洗涤柱子到干后至少15 min,再用12 mL 甲醇在较强的负压下洗涤柱子至干后至少10 min。取下C18小柱。用12 mL混合均匀的乙酸乙酯-氢氧化铵(97 + 3,v/v)溶液,洗脱柱子上的待分析成分。通氮气在(40 ± 5)℃的加热块上蒸发洗脱液。加入200 uL甲醇,剧烈涡流摇动,溶解蒸发残渣。将溶液转移至反应玻璃小瓶中。再用200 uL甲醇溶解上一步未溶解完全的残渣,溶液合并于反应玻璃小瓶中。在温度(40 ± 5)℃的加热块上蒸发甲醇至干。

3.  衍生化反应

加入100 uL的N,O-双(三甲基硅基)-三氟乙酸铵(BSTFA),并剧烈涡流摇动。将反应小瓶放置在(65 ± 5)℃的恒温箱中加热(30 ± 5) min。让小瓶和加热块冷却到室温后,通一小股氮气流蒸发至干。加入500L甲苯剧烈涡流摇动溶解蒸发残渣。溶液进入GC-MS分析。
 

来源:丁香实验

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