气相色谱-质谱法（测定动物源食品中甲状腺抑制剂残留量实验）

1. 试剂和材料

衍生化试剂1:五氟苄基溴（PFBBr）（pentafluorobenzyi bromide，97%）。

衍生化试剂2: N-甲基-N-三甲基硅基-三氟乙酰胺（MSTFA）[N- methyl-N-（trimethylsilyl）-trifluoroacetamide,97%]。硅胶：40 ～ 63 um，10 nm （100A）。乙醇钠/乙醇：称取0.2 g NaOH溶于无水乙醇并定容至50 mL。固相萃取空柱（6 mL，10 mL）。内标物：双甲基硫氧嘧啶（DMTU）。

2. 前处理

方法1:（动物组织）用均质器将动物组织样品研磨成浆状，称取0.5 g于研钵中，加入1 ug/mL内标DMTU甲醇溶液50 uL并与2.0 g硅胶混匀，室温放置3 min左右后装柱，用淋洗液洗涤研钵并上柱。10 mL氯仿淋洗，6 mL含30%甲醇的氯仿（V/V）混合溶剂洗脱。吹干洗脱液，加入0.1 mol/L EtONa-EtOH溶液5000 uL、PFBBr25 uL，25 ℃水浴中衍生10 min。用HCl将PH值调至3.0（±0.3）3 x 1 mL二氯甲烷提取，合并提取液并吹干。6 mL硅胶小柱依次用5 mL乙酸乙酯、5 mL正己烷活化；1 mL 二氯甲烷溶解残留物后上样；5 mL氯仿淋洗，5 mL 二氯甲烷-乙酸乙酯（1 + 4）的混合溶剂洗脱。吹干洗脱液，加入50 uLMSTFA、50 uL二氯甲烷。密封后60 ℃水浴中衍生30 min。衍生完毕，用正己烷定容至10 mL，待 GC-MS分析。

方法2 （动物组织）准确称取2.0 g匀浆后的动物组织于50 mL离心试管中，加入1 ug/mL内标双甲基硫氧嘧啶甲醇溶液50 uL，3x 5 mL乙腈提取，合并提取液并吹干。600 uL水溶解残留物后倾入研钵中，并与2.0 g硅胶混匀，室温放置30 min左右后装柱。10 mL氯仿淋洗，6 mL含20%甲醇的氯仿混合溶剂洗脱。吹干洗脱液，加入 0.1 mol/L EtONa-EtOH溶液50 uL、PFBBr25 uL，25 ℃水浴中衍生10 min。用HCl将pH值调至3.0（±0.3），3 x1 mL二氯甲烷提取，合并提取液并吹干。加入50 uL MSTFA,5O uL二氯甲烷。密封后60 ℃水浴中衍生30 min。衍生完毕，用正己烷定容至1 mL，待GC-MS分析。

方法3 （牛奶和尿样）准确量取0.6 mL牛奶或尿样加入研钵中，加入1 ug/mL内标DMTU甲醇溶液50 uL并与2.0 g硅胶混匀，室温放置30 min左右后装柱，用淋洗液洗涤研钵并上柱。用含5%甲醇的氯仿溶液（V/V）淋洗柱子，20%甲醇氯仿（V/V）溶液洗脱，收集洗脱液。吹干洗脱液，加入0.1 mol/L EtONa-EtOH溶液50 uL、PFBBr25 uL，25 ℃水浴中衍生10 min。用 HCl将PH值调至3.0（±0.3），3 x1 mL二氯甲烷提取，合并提取液并吹干。加入50 uL MSTFA、50 uL二氯甲烷。密封后60 ℃水浴中衍生30 min。衍生完毕，用正己烷定容至1 mL，待GC-MS分析。

3. 仪器条件

(1)色谱条件

色谱柱：DB-5MS，30 m x 0.25 mmx0.25 um；

色谱柱程序升温：100 ℃恒温2 min，15 ℃/min升至260 ℃，10 ℃/min升至290 ℃，恒温5 min；

进样口温度：250 ℃；

进样方式：不分流进样，不分流时间2 min；

载气：高纯氦气，纯度>99.99%；

进样量：10 L。

(2)质谱参数

四级杆质谱，E1电离源，电离电压70 eV，发射电流150 mA，检测电压500 V，离子源温度200 ℃；传输线温度250 ℃。选择离子扫描（m/z）甲巯咪唑：241、261、275、294； 2-硫尿嘧啶：360、365、380、381；甲基硫氧嘧啶：374、379、394、395；丙基硫氧嘧啶：402、407、422、423；苯基硫氧嘧啶：436、441、456、457；内标 4（5，6）-双甲基硫氧嘧啶：388、393、408、409。