显微冷冻切片

1.  安装刀具，移上安全杆。调整切片机温度到-20 ℃(（右手边up 和down 二个按钮调节, up调高温度, down,降低温度）。
 

2.  从-80 ℃冰箱取出脑组织在切片机或-20 ℃冰箱中放1小时左右，目的为了平衡组织温度，太冷会在切片时出现脑片破裂的情况。
 

3.  用包埋剂（胶水代替）把组织固定在载物盘上（Blocker），注意一定要把脑放正。
 

4.  后退样品固定器（specimen holder），固定载物盘，并适当调节摇杆， 使的上下左右都正。

5.  打开安全杆，.前进载物盘，到适当位置（不要离的太近，以免不小心损坏刀，也不要离的太远）。

6.  调整刀距（切片厚度，section thickness and trim thickness），摇动把手（handwheel），开始切片（sectioning）。开始的时候可以选择大一点的刀距（trim thickness, 10-500um），到一定位置时使用调到需要的最后切片厚度(section thickness, 1-20 um)。
 

7.  到适当时候，贴几张脑片以确定上下左右是否正，并对照图谱找出大概位置。注意：贴片时手放在载玻片的两头，一端靠在切片机刀尾的位置轻轻往下压。
 

8.  对照图谱找到所要找到的核团并各留具有SON，PVN，海马（CA1，CA2，CA3）的典型脑片，并作上标记。
 

确定SON后，根据图谱算出所剩刀数，切去几刀后，贴片，用伊文斯蓝染色一分钟左右，倒去染液，放在显微镜下观察，开始出现PVN时呈芽状，然后芽变大, 并向上向外扩, 成伞状。

9.  把脑片保存到-20 ℃或-80 ℃冰箱，以待以后使用。

10.  清洁切片机，复原。

切片时，切出的切片能在第一时间顺利地通过刀防卷板间的通道，平整地躺在持刀器的铁板上。这时便可掀起防卷板，取一载玻片，将其附贴上即可。