原理
免疫细胞化学是在细胞化学技术的基础上，吸收免疫学的理论和技术发展起来的一项技术，其基本原理是用荧光素或酶等标记物或显色物标记特异性抗体，通过免疫学中的抗原抗体反应与细胞内的相应抗原结合，形成带有荧光素或显色物的抗原抗体复合物，因此可用荧光显微镜或普通光学显微镜观察到复合物的存在，达到检测细胞内抗原物质的目的。细胞免疫化学是一项综合性的技术，包括标本的准备（制备、储存、固定等）、染色方法以及结果的分析判断，非特异性染色的减轻、消除等。
材料与仪器
细胞
福尔马林 丙酮 多聚甲醛
盖玻片 培养瓶 培养板
福尔马林 丙酮 多聚甲醛
盖玻片 培养瓶 培养板
步骤
一、标本制备
细胞可直接培养在盖玻片上、培养瓶内或培养板上，也可将一定量的细胞收集离心制成涂片。
二、固定和固定制
对于活细胞标本，常用的固定剂有以下几种。
1. 福尔马林类
10 %福尔马林或10 %中性福尔马林，其中以10 %中性缓冲福尔马林固定效果最好，最为常用。
2. 丙酮类
纯丙酮固定效果好，对抗原的影响也较小，95 %乙醇的固定效果与丙酮相似但不如丙酮好。如在乙醇中加入1 %冰醋酸可增强固定效果，加入少量氯仿可有利于抗体的穿透。
3. 4 %多聚甲醛类
目前尚未发现一种通用的固定剂，对各种不同的抗原都有满意的固定效果。比较而言，中性缓冲甲醛是适用性较广的一种固定液。必要时，可用多种固定液作比较，从中挑选出对某种抗原效果最好的固定液。
细胞可直接培养在盖玻片上、培养瓶内或培养板上，也可将一定量的细胞收集离心制成涂片。
二、固定和固定制
对于活细胞标本，常用的固定剂有以下几种。
1. 福尔马林类
10 %福尔马林或10 %中性福尔马林，其中以10 %中性缓冲福尔马林固定效果最好，最为常用。
2. 丙酮类
纯丙酮固定效果好，对抗原的影响也较小，95 %乙醇的固定效果与丙酮相似但不如丙酮好。如在乙醇中加入1 %冰醋酸可增强固定效果，加入少量氯仿可有利于抗体的穿透。
3. 4 %多聚甲醛类
将多聚甲醛40 g溶于0.1 M PBS 1000 ml，加热至60 ℃左右，边搅拌边加温至透明为止（一般需滴加少许1 M NaOH才能使溶液清亮）。该固定剂较温和，适于标本的较长期保存。
目前尚未发现一种通用的固定剂，对各种不同的抗原都有满意的固定效果。比较而言，中性缓冲甲醛是适用性较广的一种固定液。必要时，可用多种固定液作比较，从中挑选出对某种抗原效果最好的固定液。
注意事项
1. 活细胞标本制备好后应立即固定，以防止细胞自溶，保持其固有的组织结构，保存细胞内的抗原性，使抗原不失活，不发生弥散和保证免疫组化定位准确。标本固定后必须彻底清洗、除去多余的固定液，否则将影响免疫组化染色效果。
2. 一般固定剂以室温（22℃）为宜，某些酶的固定，要求在37 ℃下进行。固定时间因固定剂、温度及抗原成分等因素的不同而异。时间过短，固定不充分，影响抗原保存的完好性，但也不是越长越好，时间过长亦会对抗原、细胞形态有影响，从而影响免疫组化效果，所以应该掌握适当。固定时间：酒精、丙酮5～15 分钟，多聚甲醛3～5分钟，福尔马林10～15 分钟。
2. 一般固定剂以室温（22℃）为宜，某些酶的固定，要求在37 ℃下进行。固定时间因固定剂、温度及抗原成分等因素的不同而异。时间过短，固定不充分，影响抗原保存的完好性，但也不是越长越好，时间过长亦会对抗原、细胞形态有影响，从而影响免疫组化效果，所以应该掌握适当。固定时间：酒精、丙酮5～15 分钟，多聚甲醛3～5分钟，福尔马林10～15 分钟。
来源：丁香实验
